鼠胚胎干细胞定向诱导为角膜上皮细胞的实验研究.pdfVIP

2013年3月第 1O卷第8期 · 论 著 · 的供体来源。 特异性角膜上皮细胞标志物 。而CD44也存在于角膜上皮 ES细胞是一种具有全能性、可无 限增殖和多向分化 细胞中，功能与组织修复有关 ，它可以促进角膜上．皮 的愈 潜能的未分化细胞，具有两个重要特性：① 自我更新潜能。 合 。本实验诱导分化的上皮细胞 CD44和 K12表达阳性 ． 干细胞在未分化状态下可不断增殖，从而可自我更新。② 而表达 KI4阴性 ，说明诱导分化的细胞是角膜上皮细胞 ． 多向分化潜能。在体内外 ES细胞均有分化成许多特定细 而非结膜上皮细胞 。提示 ES细胞能在体外定向诱导分化 胞类型的能力。它能迁移到不 同部位分化成相应的细胞类 为角膜上皮样细胞。本研究应用 RT—PCR技术检测 ES细 型，恢复受损细胞 的功能：，成为一种新型细胞替代治疗和 胞及分化的角膜上皮样细胞 中均有 K12及 CD44的表达 ． 基因治疗的途径 。经丝裂霉素 C处理的含LIF的MEF作 而结膜上皮标志物K14则无表达 ，证实转染GFP后的ES 为饲养层，能够抑制ES细胞 的分化和促进其增殖 ，并使其 细胞 向角膜上皮细胞方向分化。 保持未分化状态以及多向分化潜能嘲。本研究将Ⅳ型胶原 总之 ，通过以上实验本研究成功建立了转染 GFP基因 作为诱导剂 ．加入不含 LIF的培养板中，诱导体外培养的 的ES细胞系 ，并利用Ⅳ型胶原体外诱导 ES细胞定 向分化 ES细胞 向角膜上皮细胞分化。 为角膜上皮样细胞 ，为临床治疗角膜损伤提供新 的材料来 GFP是一种 由238个氨基酸组成的蛋 白，作为荧光标 源。 记分子 ，在研究细胞的分化 、细胞移植中具有重要作用6[1。 参【考文献】 本研究用脂质体方法将含有 GFP的质粒转染至小 鼠ES … KinoshitaS，AdachiW，SotozonoC，eta1．Characteristicsofthehu— 细胞 中。选择G418筛选并纯化后 的GFP阳性ES细胞 。将 manoculrasuffaceepithelium J【】．PmgRetinEyeRes，2001，20(5)： 639-673． 这些能够持续表达GFP的ES细胞在诱导条件下分化成角 [22】MartinGR．Isolationofapluripotentcelllinefromeralymouseembryos 膜上皮样细胞 ，并稳定表达GFP。证明GFP基因已完全整 culturedinmediumconditionedbyteratocarcinomastem cells[J1． 合到 ES细胞基 因组中．这对 ES细胞在体 内的分化 、迁移 ProcNatlAcadSciUSA，1981，78(12)：7634—7638． 及整合具有重要意义。 3【】唐仕波，邱观婷，黄冰，等．胚胎干细胞向神经细胞诱导分化的实验 本研究对诱导分化后的ES细胞进行 了形态学观察 ， 研究Ⅲ．中华医学杂志，2000，80(12)：936—93