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二十二章 免疫学检测技术的基本原理 免疫学检测是应用免疫学理论设计 的一系列测定抗原、抗体、免疫细胞及其分 泌的细胞因子的实验手段。 免疫学技术的应用极为广泛,可用于疾病的诊断、发病机制的研究、病情监 测与疗效评价等。 第 1 节 体外抗原抗体结合反应的特点及影响因素 一、抗原抗体反应的原理与特点 (一)原理: 抗原与抗体的特异结合反应，是基于抗原决定基与抗体的抗原结合部位之 间的结构互补性 （二）抗原抗体反应的特点 1.高度特异性 抗原与抗体的特异结合反应，是基于抗原决定基与抗体的抗原结合部位之间 的结构互补性。 一般一种 Ag 只能与其所诱生的 Ab 结合。依此，可用已知 Ag 检测相应Ab； 或用已知 Ab 检测相应 Ag。但如两种抗原具有相同或相似的抗原表位，则其中一 种抗原诱导机体产生的抗体可与另一种抗原发生交叉结合。 2. 表面化学基团之间的可逆结合 AgAb 的结合，是分子表面的结合，为非共价键的可逆结合。这种结合不如共 价键结合稳定，在一定条件下，结合的 AgAb 复合物可以解离，其解离难度取决 于两个方面:一是 Ag 与 Ab 的亲和力（affinity）有关, 亲和力指 Ab 分子上一 个抗原结合部位与相应抗原决定基之间的结合强度,亲和力越高,越难解离,反 之越易解离.二是抗原抗体反应的环境条件,如温度、酸碱度、离子强度等. 3. 适宜的抗原抗体比例和浓度 天然 Ag 分子表面含多种/多个 Ag 表位，可与多个 Ab 分子结合；Ab 分子若为 单体 Ig，则有两个 Fab，能结合两个相同的 Ag 表位。当 AgAb 比例适当，在适 量电解质存在时，两者相互结合，形成肉眼可见的大分子 AgAb 复合物（如沉淀 物或凝集物）。若 AgAb比例不适当时（如 Ag过剩或 Ab过剩），两者虽可结合， 却不能形成肉眼可见的复合物。 4.抗原抗体反应分两个阶段进行 ⑴特异性结合阶段:抗原分子与抗体分子间的互补的共价结合,反应迅速,可在 数秒-数分钟内完成,但无可见反应. ⑵可见反应阶段:抗原抗体复合物之间通过正、负电荷吸引形成肉眼可见的较大 复合物，需数分、数小时至数日不等，易受电解质、温度、酸碱度等因素的影 响。 二、抗原抗体反应的影响因素 1.电解质:抗原、抗体表面均带有较多的负电荷，加入适当浓度的电解质（如 0.85%NaCI)可使之失去部分负电荷而有利于抗原抗体的结合. 2.温度:在一定范围内,温度越高,形成可见反应的速度越快.通常 37℃是抗原抗 体反应的最适温度. 3.酸碱度:抗原抗体反应的最适 pH 在 6-8 之间,pH 过高或过低均可影响抗原、抗 体的理化性质.如pH接近抗原或抗体的等电点时,可使抗原与抗原分子间或抗体 与抗体分子间自身相互结合而导致非特异性凝集,此为假阳性反应. 第 2 节 检测抗原和抗体的体外试验 * 根据反应的基本原理与表现主要分为凝集反应、沉淀反应和采用标记物的 抗原抗体反应等。 * 体外的抗原抗体反应常需采用含特异性抗体的血清作试验，故称其为 血清学反应。 一、凝集反应（agglutination） 1、直接凝集反应 原理：细菌、红细胞等颗粒性 Ag 与相应 Ab 结合形成凝集团块 方法： ①玻片法 用于定性测 Ag，如 ABO 血型鉴定、细菌鉴定 ②试管法 用于定量测 Ab，如肥达试验 2、间接凝集反应 原理：将可溶性 Ag 或 Ag 包被在与免疫无关的载体颗粒表面，形成致敏载 体(免疫微球),与相应 Ab 或 Ab反应出现颗粒物凝集。 分类：（正向）间接凝集反应：已知 Ag 吸附于载体颗 粒检测相应 Ab 反向间接凝集反