成瘾性药物诱导基因表达调控及其对药物奖赏行为影响研究.pdfVIP

中文摘要 药物成瘾是一种慢性、复发性脑疾病，表现为不计任何负面后果的、强制性的、无 法自控的药物使用行为。越来越多的研究表明，长期滥用成瘾性药物导致奖赏相关脑区 基因表达的异常，是成瘾行为形成及维持的重要的分子机制之一。因此，阐明基因表达 的调控在药物成瘾行为中的作用及其机制尤为重要。 转录后水平调控的重要因子之一。它通过其2．8个碱基的种子区识别并结合到下游靶基 进而发挥抑制或降解靶基因mRNA的作用。近年来，很多体外以及体内的研究揭示了 miRNA在神经系统中的重要功能。但是miRNA在药物成瘾中的作用及作用机制，尚不 清楚。 表观遗传学修饰是对基因转录进行调控的重要方式之一，主要是通过基因启动子区 域染色体的重构来发挥调节基因转录的作用。一般来讲，基因启动子区域组蛋白H3或 H4的乙酰化能激活基因的转录。近年来，人们逐步发现了组蛋白乙酰化也在药物成瘾 中发挥作用。但作为对基因转录水平调控的一种重要方式，组蛋白乙酰化如何参与对成 瘾动机的调控尚未阐明。 Place 本研究采用大鼠条件位置偏爱模型(CPP，Conditioned Preference)和自身给 行为的影响和组蛋白乙酰化在可卡因觅药动机中的作用机制，取得了以下主要研究结 果： 1．长期海洛因给药诱导的大鼠伏隔核miR-218下调及其对海洛因奖赏行为的调控 天2次，连续2周)后，我们采用real—time PCR的方法检测了伏隔核中76种miRNA 长期海洛因给药下调伏隔核中miR．218成熟体的水平。我们采用real．timePCR的方 在伏隔核中也显著下调，而在海马中没有显著变化。另外，miR．218在前额叶皮层显示 出明显下降趋势，但无统计学差异。 伏隔核中miR-218对大鼠海洛因CPP和自给药行为的负性调控。为了研究伏隔核中 miR一218对海洛因奖赏行为的影响，我们用慢病毒定位注射的方法干预伏隔核中内源 miR一218的表达，然后检测其对海洛因CPP和自给药的影响。我们发现用重组慢病毒在 大鼠伏隔核中过表达miR．218H…e显著降低海洛因诱导的CPP；相反，在伏隔核中用重组 中过表达miR一218后，大鼠海洛因自身给药的踏板行为明显减少，而抑错qmiR一218后， 大鼠的踏板行为明显增加。这些结果提示，伏隔核中miR．218能负性调节海洛因奖赏行 为。 伏隔核qbmiR-218水平改变不影响大鼠蔗糖自给药和八臂迷宫行为。为了检测伏 隔核中miR．218水平变化是否影响自然奖赏和空间学习记忆，我们进行了蔗糖自给药和 八臂迷宫实验。在蔗糖自给药实验中，注射了过表达或抑带lJmiR．218病毒的大鼠与对照 大鼠相比，摄取蔗糖丸的数量没有差异。在八臂迷宫实验中，也没有观察到注射过表达 或是抑fl；lJmiR．218病毒的大鼠与对照大鼠在完成任务的时问上存在差异。 2．筛选miR-218的下游靶基因 鼠神经元中转染miR．218后转录水平发生变化的基因。结果显示，在29993个基因序列中， 我们检测到了20020个基因在原代培养的神经元中有表达。与对照组相比，有1990个基 的可能靶基因。采用Real．timePCR的实验结果显示，在原代神经元中miR．218可以下调 这些候选基因的mRNA水平。 调节。为了进一步确认Gf砍2和G么歙曰3是否为miR．218的靶基因，我们分别应用体外荧 光素酶报告基因实验和体内慢病毒定位注射实验检测miR．218是否可以识别这两个基因 GABRB3 miR一218结合位点引入突变，这种调控作用消失。此外，我们还进一步证明用慢病毒在 基因。 和GABRB3的mRNA水平在海洛因给药后的变化，发现与生理盐水对照组和海洛因一次 给药组相比，长期海洛因给药能上调伏隔核G，艘2和G4删B3基因的mRNA水平，而这 的相关性分析表明，伏隔核中的GluR2mRNA水平和海洛因CPP评分正相关，而海马脑 区中的GluR2 复旦太堂蝗±堂焦途塞 遢控基固查达过垫塑奖堂堑麴的墅堕壁扭剑的盟窒 mRNA水平与海洛因CPP评分相关性均不显著。 3．可卡因长期给药诱导的伏隔核组蛋白乙酰化升高和C