椰子AFLP分子标记反应体系的建立.pdfVIP

江西农业学报 2010，22(1)：66—68 ActaAgriculturaeJiangxi 椰子AFLP分子标记反应体系的建立 吴翼 ，于娇 ，蒙鹏 ，马子龙 ，潘坤 ，曹红星 ，韩明定 (1．中国热带农业科学院椰子研究所，海南文昌571339；2．琼州学院，海南五指山572200；3．海南大学海洋学院，海南 海口570228) 摘 要：以椰子叶片为试材，通过对AFIJ)反应体系中的几个关键因素进行优化，建立了适宜椰子的AFLP分予标记反应 体系。本研究最终确定了20 LPCR反应体系的最佳条件为：预扩增产物稀释20倍液2IxL，dNTPs0．5 L，引物 1．0 L，Taq 聚合酶0．2 上，MgCl22．O 。该优化体系稳定可靠，适合应用于椰子AFIJ)分析。 关键词：椰子；AFLP；分子标记；优化 中图分类号：$667．4 文献标识码：A 文章编号：1031～8581(2010)01—0066一o3 OptimizationofAFLP—PCR ReactionSystem inCoconut WUYi，YUJiao ，MENGPeng3 MA Zi—long，PAN Kun ‘，CAO Hong—xing，HAN Ming—ding ， (1．CoconutResearchInstitute．ChineseAcademyofTropicalAgficulturalSciences，Wenchang571339，China； 2．QiongzhouUniversity，Wuzhishan572200，China；3．OceanCollegeofHainanUniversity，Haikou570228，China) Abstract：TotalgenomicDNA isextractedfrom theleafletsofcoconut，andthesuitableAFLP—PCRreactionsystem ofcoconut isestablished．Theoptimumreactionsystem (20 L)consistsof2txL20timesdilutionofthepre—amplificationproduct，0．5 L dNTPs，1．0ILLprimerpairs，0．2 LTaqDNApolymerse，2．0 LMgCl2．Theresultshowsthatthissystem isstbaleandrelibale， andcallbeusedintheAFLPnaalysisofcoconut． Keywords：Coconut；AFLP；Moleculra marker；Optimization 椰子(CocosnuciferaL．)是典型的热带木本油料作 标记反应体系，以期为后续的研究工作提供技术支持。 物和食品能源作物，在世界热带93个国家和地区广泛种 l 材料与方法 植。在我国，椰子的栽培已有两千多年的历史，在长期的 1．1 材料 自然进化和人工栽培驯化的条件下已经形成许多变种、 1．1．1 试验材料 以6个椰子品种的嫩叶为试材，试材 品种和类型。目前对我国椰子种质资源的遗传背景尚无 采 自中国热带农业科学院椰子研究所椰子种质圃。反应 系统地研究，从而不利于我国椰子种质资源的保护、开发 体系的优化以海南本地高种椰子的DNA为模板。 和利用。因此，探索分子标记技术在我国椰子种质的标 1．1．2 主要 试 卉} 25mmol／LMgC12、2．5mmol／L 记特征对阐明我国椰子种质问的亲缘关系和系统进化， dNTPs、5U／I~LTaqDNApolymerase、10×TaqBuffer购 自 指导椰子育种的基本选择，建立椰子种质的鉴定方法等 上海生工生物工程技术服务有限公司，T4DNAligase购 具有重要理论和实践意义。 自宝生物工程(大连)有限公司，其它常规试剂购 自广州