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基于T细胞受体基因的血液肿瘤免疫治疗研究 暨南大学医学院血液病研究所李扬秋李闯 获得性抗原特异免疫治疗是目前肿瘤免疫治疗最为理想的方式之一，它不因病人自身的免疫活 性而影响疗效，所输注特异性淋巴细胞可以有效靶向肿瘤相关抗原，后者由于免疫原性低不能引起 有效的自体抗肿瘤T细胞免疫应答。由于分离和体外扩增抗原特异淋巴细胞的限制，传统的获得性 免疫治疗仅仅限于某些特定研究中心的少数病人的应用。借助对抗原特异淋巴细胞的T细胞受体 (TCR)基因分析结果，将TCR作为基因治疗分子而实施新的非传统性的获得性抗原特异免疫治疗 正在研究中。 一、T细胞受体基因 T细胞受体(TCR)是T细胞表面特异性识别抗原和介导免疫应答的分子。TCR包括有a、B、 7和8四种肽链，以两种形式存在，由二硫键连接形成异二聚体“J3或7／8蛋白链。在正常儿童和 成人中，血液中的大部分T细胞表达，I℃R邮异二聚体，而仅表达少量的TCRY8分子。外周血中 rI℃脚+T细胞占90％一95％，而TCRy艿+T细胞仅占5％～10％。 TCR属免疫球蛋白超家族，与免疫球蛋白(Is)的结构相似，具有抗原特异性的V区(可变 区)和恒定区(C区)。TCR识别抗原的特异性和多样性在于其V区的多样性，该多样性来自于 TCR基因谱系和重排的特点。构成了T细胞对众多外来抗原的特异识别和产生免疫应答的巨大潜 力。 TCR基因的结构与k基因相似，在胚系中，编码TCR链的DNA是由多个分隔开的基因片段组 成，在胸腺细胞发育过程中重排后，形成编码一条完整肽链的基因。每一个TCR胚系基因包括可 变区(V区)、结合区(J区)和恒定区(C区)等基因片段，在rI℃邢和rI℃硒基因中还包含多样 区(D区)。在TCR胚系基因的5’端包含不同数量的V区基因片段，并将其分成多个亚家族。此 片段一般分为24个亚家族，而TC鼬基因多分为29个亚家族。 TCR基因的重排过程也与Ig基因重排相似。在前T细胞中，TCR基因处于无功能的胚系结构 状态，在前T细胞分化成熟为双阳性细胞的过程中，TCR基因片段按限定的顺序进行重排，形成功 能性TCR，重排的过程是TCR表达的先决条件。TCR重排过程首先由重组酶识别RSS而启动的。 首先由随机的一个D区和一个J区发生重排，然后是随机的一个V区与已重排的DJ区发生重排， 在V—D和D—J各基因片段连接的过程中，有不同数量的核苷酸(3。24个)随机的插入，称为N 区，故在V区与D区、D区与J区的连接处，均有不同数量核苷酸的N区，形成了vN(D．)J的重 排基因，同时，参加重排的D区基因片段可长可短，并不一定为整个D区的基因片段，最后，不 称为互补决定区3(cDR3)，它是识别抗原的区域，由于N区的插入和D区重排时的长短不一，即 并不仅仅依据各V、(D)、J区基因片段随机组合的数量，更与结合过程的多样性(CDR3)有关， 从而形成了T细胞识别不同抗原的高度多样性。通过分析TCR亚家族基因和重排的特点，就可以 了解抗原特异的TCR基因序列。 抗原特异T细胞的确定 获得抗原特异CTL是实施靶向过继性免疫治疗的关键，它可由病人体内肿瘤抗原刺激而产生， 也可经体外特定抗原诱导而获得，后者包括自体和异基因抗原诱导的特异CTL。体外诱导特异CTL 的血液肿瘤抗原包括采用整个肿瘤细胞、肿瘤细胞凋亡产物、人工合成的多肽(融合基因、癌基因 产物等)和独特型抗原等。利用肿瘤细胞或肿瘤细胞凋亡产物等诱导的CTL，由于存在多种肿瘤抗 原或多个肿瘤抗原决定簇等情况，往往出现1个以上的TCRv“w亚家族的T细胞扩增。越来越多 的研究应用针对某一癌基因产物、融合基因产物或突变基因产物等等，而设计的人工合成HLA限 MTG8等)，直接或通过DC刺激T细胞，均有可能获得单一的抗原特异克隆性CTL。 TCR邯基因分析是基于每一克隆增殖T细胞均存在相同的邵一邛一Jp重排，构成抗原特异的互补 细胞，从而了解抗原特异CrIL的分布。 三、TGR基因转导技术和抗原识别模式改构 体外实验和小鼠动物模型体内研究均显示抗原特异CTL具有靶向杀伤抗原负载肿瘤细胞的作 用，提示了可以通过分选和扩增这些特异性的TCRVt3亚家族T细胞克隆应用于肿瘤或病毒感染等 患者的免疫治疗，经体外的实验完全证实了这种可能性，但真正能用于病人治疗的方案却寥寥无 几，其原因在于短时间内很难从患者的T细胞或患者白血病抗原诱导的异基因T细胞中获得足够数 量的CTL用于治疗。所以，如何获得足够数量白血病抗原特异CTL是更为主要的问题。通过转导 能够识别