-防御素9基因的克隆、组织分布及其原核表达.pdfVIP

中国农业科学 2009,42(4):1406-1412 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2009.04.034 鸭 β-防御素9基因的克隆、组织分布及其原核表达 1,2 1 2 2 廖文艳 ，马得莹 ，刘胜旺 ，韩宗玺 1 2 （东北农业大学动物营养研究所，哈尔滨 150030 ； 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室， 哈尔滨 150001 ） 摘要：【目的】从鸭组织中克隆鸭β-防御素 9（AvBD9）基因，在原核表达重组鸭 AvBD9 蛋白；研究重组鸭 AvBD9 蛋白的体外抗菌活性与理化特性。【方法】采用 RT-PCR 法，从鸭肝脏组织中扩增鸭 AvBD9 基因，测定该基 因在鸭各组织器官中的分布；将鸭 AvBD9 基因克隆到大肠杆菌原核表达载体 pGEX-6p-1 上，构建重组表达质粒 pGEX-duck AvBD9，将重组质粒转化大肠杆菌BL21，用IPTG诱导表达；亲和层析纯化蛋白，利用薄层平皿琼脂糖 孔穴扩散法测定重组鸭AvBD9蛋白的体外抗菌活性与理化特性。【结果】从鸭肝脏组织中克隆得到鸭AvBD9基因， 序列分析表明该基因大小为 204 bp，前体肽包括 67 个氨基酸残基。AvBD9 基因在鸭体内广泛分布。SDS电 泳表明鸭AvBD9基因在大肠杆菌中高效表达，表达的重组鸭AvBD9融合蛋白以包涵体的形式存在，分子量约31 kD。 重组鸭 AvBD9 蛋白对大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽胞杆菌有抗菌活性，在 -70～100℃或pH 3～10处理30 min后仍有抗多杀性巴氏杆菌作用。【结论】鸭AvBD9基因为204 bp，编码67个 氨基酸残基，在鸭组织中广泛分布。重组鸭 AvBD9 蛋白基因在大肠杆菌中高效表达，该重组蛋白具有广谱的抗菌 活性，对温度和酸碱性有较高的稳定性。 关键词：鸭；AvBD9；组织分布；重组蛋白；抗菌活性 mRNA Cloning, Tissue Distribution and Expression of Duck Avian Beta-Defensin 9 in E. coli 1,2 1 2 2 LIAO Wen-yan , MA De-ying , LIU Sheng-wang , HAN Zong-xi 1 2 ( Institute of Animal Nutrition, Northeast Agricultural University, Harbin 150030; Division of Avian Infectious Disease, National Key Laboratory of Veterinary Biotechnology, Harbin Veterinary Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Harbin 150001) Abst