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南京农业大学学报 2006，29 (3)：33 38
JournalofNa ngAgriculturalUniversity
水稻 白叶枯病菌 基因的克隆、测序及敲除研究
杨万风，刘红霞，娄吻，胡 白石，许志刚，刘凤权
(南京农业大学农业部病虫监测与治理重点开放实验室，江苏 南京 210095)
摘要：根据黄单胞菌gaeA基因的同源性设计简并引物，采用 PCR方法从水稻白叶枯病菌 (Xanthomonasoryzaepv．
oryzae，Xoo)中克隆了gacA同源基因，命名为gacAx~。序列比较显示 ，该基因在黄单胞菌中是相对保守的。蛋白质保
守结构域搜索表明，GacA 属于LuxR家庭的一员 ，具有与其他 GacA蛋白相似的结构。通过同源重组的方法 ，构建了
gacAx 的插入突变体，为下一步研究gacAxoo的功能奠定了良好的基础。
~
关键词：水稻白叶枯病菌； 基因；基因敲除
中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1000—2030 (2006)03—0033—06
uClioomninngg，●sseeqqulencintggaanndkl~nnoocck-oouuttoofigacA genneeflrroqm
Xanthomonasoryzaepv． oryzae
YANG Wan-feng，LIU Hong-xia，LOU Yang，HU Bai—shi，XU Zhi—gang，LIU Feng—quan
(KeyLaboratoryofMonitoringandManagementofPlantDiseasesandInsects，MinistryofA culture，
NanjingA culturalUniversity，Nanjing210095，China)
Abstract：AgacA homologue，designatedgacAx~ ， wasclonedfromthegenomicDNAofXanthomonasoryzaepv．oryzae (Xoo)，
abacteriumthatcausesbacterialblightofrice，withdegeneratedprimersbypolymeraseamplificationreaction (PCR)．NCBIblast
searchindicatedthatGacAx hadasimilarstructuretothatofotherGacA proteins，andhadconserveddomainofLuxR—likepro—
。 。
teins．SequencecomparisonshowedthatgacAX wasconservedintheXanthomonasgenus．A gacAx~disruptionmutantWas SUC—
oo
cessfuHygeneratedbyasinglecross—overevent，selectedbyAmpresistanceonNA medium andconfirmedbyPCR andSouthern
，
blot．ThismutantisausefultoolforfurtherstudyonthefunctionofgacAx inX．oryzaepv．oryzae．
~
Keywords：Xanthomonasoryzae
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