抗肿瘤血管三结构域单链抗体VHL构建与表达.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! ! %’(!)(! 年 月 #$$! ! !#$%%’()*$+,( .#(/%0$(,( *+,-+. #$$! - 12 / !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 抗肿瘤血管三结构域单链抗体 ／ 的构建与表达 ! # 吴小平 杨东玲 张志强 阎锡蕴 （中国科学院微生物研究所微生物资源前期开发重点实验室，北京 ） !$$$2$ 摘 要 以本室研制的一株抗肿瘤血管单克隆抗体 为基础，采用 扩增抗体 基因的重链可变区 @@42 ABC @@42 （ ）和轻链（），以重链恒定区 （ ）端 个氨基酸的序列作为连接肽，并将连接肽中的 突变为 ，构建 % E !B !1F !# E G6. D D / 连接肽 三结构域单链抗体。重组 ／ 单链抗体在大肠杆菌中得到了高效表达，其表达量占菌体总蛋白质 % 0 0E % E D D 的 。表达的蛋白质在菌内形成包含体，经凝胶过滤法复性，获得了有抗原结合活性的 ／。该三结构域单链 #$H % E D 抗体的成功构建和复性，为重组抗体片段的研制提供了借鉴。 关键词 ／ 抗体片段，构建，表达，复性 % E D 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） I23 @ !$$$08$7!#$$!$!0$$1$0$1 ［］ 抗体分子的抗原结合部位局限在可变区，因此 而影响抗体的空间折叠# 。该连接肽的设计可为 可以构建具有抗原结合功能的抗体片段。常见的抗 其它单链抗体的构建提供重要的参考。同时，本文 体功能片段有（）单链抗体，最常见的是在 水 首次报道了 ／ 包含体的成功复性。 ! J)@ % E D 平将轻重链可变区基因通过一段连接肽连在一起， $ 材料与方法 使之表达成一条包含两个结构域的单链抗体即% 0 D 连接肽 单链抗体。但三结构域组成的单链抗体 $%$ 材料