hBD1稳定表达细胞株的建立及其表达产物对多重耐药菌的活性检测.pdfVIP

·1138- ．免疫检测． hBDl稳定表达细胞株的建立及其表达产物 对多重耐药菌的活性检测 崔南 陈新年 魏莲花 李娟 邹凤梅 【摘要】 目的构建人B防御素1(hBDl)稳定表达细胞株并检测其对多种多重耐药菌的抗菌 活性。方法将重组质粒pCMV—hBDl通过阳离子脂质体转染于非洲绿猴SV40转化的肾细胞(COS一 7细胞)，经过G418压力筛选后获得单克隆细胞株；提取细胞总RNA，用RT—PCR检测目的基因在转 录水平的表达；收集细胞培养上清液，用Westernblot检测hBDl基因蛋白的表达；将含有表达产物 hBDl的细胞培养上清液分别同各耐药菌液混合，37％孵育不同时间后涂布于LB平板，以各实验组 和对照组的菌落数的比值作为该耐药菌的存活率。结果 经过G418压力筛选所得到的稳定表达细 胞株，在转录水平和蛋白水平均检测到目的基因hBDl的表达，在表达产物hBDl的作用下，多重耐药 鲍氏不动杆菌、多重耐药大肠埃希菌存活率和多重耐药肺炎克雷伯杆菌的存活率可以分别降至9％、 22％和50％，多重耐药嗜麦芽窄食单胞菌的存活率同对照组没有明显差异。结论成功获得hBDl 稳定表达细胞株，目的基因hBDl的表达产物对多种多重耐药菌均具有抗菌活性。 【关键词】 人B防御素1；稳定表达；多重耐药；生物活性 Constructedacelllineto hBDl anddetectedtheantimicrobialoftlBDlto expressstabHy activity resistantbacterialstrainsCUl Nan‘，CHEN Lian—hua．LIJuan，ZOU multidrug Xin—nian，WEl FeT曙一 BasicMedical mei．+DepartmentofPathophysiology，Schoolof Sciences，LanzhouUnwe巧毋，Lanzhou 刀DDDD．China author：CHEN蕊n—nian，Entail：chenxn@lzu．edu．Cn Corresponding Toestablishedacelllinethat hBDl detectedthean- 【Abstract】objecfive expressesstably，and timicrobial thehBDltothe strains．MethodsRecombinant of resistantbacterial activity muhidrug plasmid in medium G418to wasintroducedintoCOS-7cells wereselectedculture bylipofectamine．cells containing monoclonalcelllines．totalRNAwereextractedfromthecultured levelsof acquired山e cells．expression hBDlmRNAwasidentified the solutionofthecultured byRT．PCR．collectedsupernatant cell。expression levelsof wasidentifiedWesternblot．Putthe