建立水产品中己烯雌酚残留ELISA检测方法.pdfVIP

中国畜牧兽医 2010年第37卷第10期 生物技术 ·43· 建立水产品中己烯雌酚残留ELISA检测方法 赵新字1，王权1，闰叶娜2 (1．中国农业科学院上海兽医研究所兽医公共卫生实验室，上海200241；2．南京农业大学，南京210095) 摘要：本试验利用己烯雌酚(DES)单克隆抗体，通过优化反应条件，加标回收试验，确定EI。ISA检测方法相关参数，建立 了已烯雌酚残留的酶联免疫吸附(ELISA)检测法。试验结果显示，包被抗原最佳浓度为2 pg／mL，DES单克隆抗体最佳稀释 倍数为1：3×104；标准曲线呈线性相关。相关系数R2=0．9956，ICs。=1．103ng／mL，最适检测范围为0．125～128 ng／mL，检 测敏感度为0．077 验结果表明，该单抗与己烯雌酚单羧丙基醚交叉反应率为112．7％，与其它水产禁用药物交叉反应率o．1％。 关键词：己烯雌酚；药物残留；酶联免疫吸附法 中图分类号：s859．84 文献标识码：A 文章编号：1671-7236(2010)10—0043—05 己烯雌酚(DES)是一种人工合成的雌激素，由1．1材料DES为上海某生物医药科技有限公司 于其具有促进动物增重，增加蛋白质沉积和减少脂 产品，纯度为99％；HRP标记的山羊抗小鼠二抗、 肪沉积的作用，曾被广泛作为鱼饲料添加剂使用，可 鸡卵清白蛋白0VA、明胶、四甲基联苯胺(TMB)均 提高鱼饲料转化率，促进鱼类生长(Heizman， 1994)。Nielsem等(2000)研究结果发现，DES具有单克隆抗体由上海兽医研究所兽医公共卫生实验室 Sci- 致畸和致癌的毒性。己烯雌酚现已被所有国家禁止 制备；己烯雌酚ELISA检测试剂盒为美国Bioo 在水产养殖中应用(王凤菊等，2003)，而且规定水产entiIic公司产品。黄鳝购自上海欧尚超市。可拆卸 品中不得检出己烯雌酚(李凯年等，2003)。为了确式酶标板为Costor公司产品；多功能酶标仪及操作 保动物性食品安全和中国水产品出口贸易的畅通， 建立快速、灵敏的检测技术成为当务之急。 海济成分析仪器有限公司产品；RE一85Z旋转蒸发仪 目前，检测己烯雌酚的方法较多，主要分为理化 购自上海青浦沪西仪器厂。 分析方法(气相色谱／质谱联机法、高效液相色谱法) 1．2 方法 1．2．1 己烯雌酚间接竞争ELISA反应条件的优化 和酶联免疫吸附法(ELISA)(刘万山等，2007)，其 1．2．1．1 中，ELISA法是中国目前水产品中DES残留检测 最佳包被原、抗体工作浓度的选择分别 的标准方法，具有操作简便、灵敏度高、样品容量大、 以8、4、2、1、0．5 仪器化程度和分析成本低等优点，是目前最理想的 被酶标板，每个浓度包被2列；将单抗进行倍比稀 X X 残留筛选性分析方法之一。本试验采用己烯雌酚单 释，浓度为：1：5 103、1：1×104、1：2104、 X X 克隆抗体，通过优化反应条件，加标回收试验，确定 1：3 104、1：4×104、1：6104、1：8X104、 ELISA检测方法相关参数，建立了己烯雌酚残留的1：12×104，以纵向梯度加入，每个浓度设定2