Trp53基因剔除小鼠的制备及其在药物致癌性评价中的应用.pdfVIP

Animaland Medicine 418 实验动物与比较医学LaboratoryComparative Dec．2013．33(6) doi：10．3969／j．issn．1674—5817．2013．06．002 ·论著· Trp53基因剔除小鼠的制备及其 在药物致癌性评价中的应用 林丹，郑晋华，庄华，石吉晶，林珥琳，王铸钢，匡颖 (上海南方模式生物研究中心，上海201203) 【摘要】目的建立Trp53基因剔除小鼠模型。方法本研究拟通过基因工程技术建立Trp53基因 因的表达；观察三种基因型小鼠自发肿瘤情况并进行病理分析；以N一甲基亚硝基脲(MNU)为致癌 剂，探索该模型用于药物致癌性评价的可行性。结果DNA、RNA及蛋白水平的研究证实，已 成功获得r，．p53基因剔除小鼠模型。初步的表型分析显示：Trp53基因纯合缺失小鼠自出生13周 起陆续发生肿瘤，至36周时所有观察纯合小鼠均死于肿瘤，以恶性胸腺淋巴瘤为主(60％)。与野 生型小鼠相比，基因杂合缺失小鼠对致癌剂的敏感性显著提升，杂合小鼠经75 mg／kg体重的N一 甲基亚硝基脲(MNU)诱导，90％的小鼠发生肿瘤，其中86％为恶性胸腺淋巴瘤，而野生小鼠经药 物诱导后只有60％发生肿瘤。腹腔注射枸橼酸缓冲液的80只对照组小鼠均未观察到肿瘤的发生。 结论 这一模型的建立为Trp53基因功能研究和药物致癌性评价提供了理想的动物模型。 [关键词】Trp53基因；基因剔除；肿瘤发生；药物致癌性评价 [中图分类号】Q95—33【文献标识码]A[文章编号]1674—5817(2013)06—0418—07 肿瘤抑制基因Trp53是迄今发现的与人类肿瘤控细胞代谢通路、胚胎植入过程等方面也发挥了重 相关性最高的基因，自1979年发现以来，该基因要作用。随着转基因和基因剔除技术的建立，自 编码的蛋白一直是生物医学领域研究的热点，在 1990年起世界各国科学家相继建立了转基因、基 因剔除、基因敲入、条件性基因剔除(敲入)等三十 Pub—med中有关p53蛋白的文章已超过5万篇，并 仍以每周数篇的速度增长，世界上每两年就会召开 余种Trp53基因工程小鼠模型【2】，这些模型的建立 一次国际p53蛋白研讨会，足见这一蛋白的重要 为Trp53基因功能研究、肿瘤发病机理研究、药 性。Trp53基因是目前研究最透彻、功能最强大的物筛选及安全性评价做出了重要贡献。 抑癌基因，人类50％以上的恶性肿瘤组织中均会 药物致癌性评价是新药安全性评价的重要组成 部分，Trp53基因剔除小鼠模型用于药物致癌性评 检测到Trp53基因的突变…，同时Trp53基因在调 价研究因其具有时间短、动物使用量少、遗传背 景一致、节省费用等优点，已得到美国药品食品 【收稿日期】2013．05．08 监督管理局(FDA)、欧洲专利药品委员会(CPMP)、 [基金项目】上海市科委项目资助(11DZ2292400)，“十二 1BAll5802) 五”科技支撑计划重大专项(201 日本厚生省(MHLW)的认可【31。我国在此方面的研 [作者简介】林丹(1978一)，女，硕士，助理研究员， 究起步较晚，目前尚无自主研发的Trp53基因剔除 E—mail：Lindan666666@sina．com 小鼠模型。为满