鸡性早熟基因KISS1克隆及表达验证分析.pdfVIP

遗 传 育 种 鸡性早熟基因 KISS-1 克隆及表达验证分析* 14 韩威，苏一军，张学余，屠云洁，李国辉，宋迟，徐文娟 （中国农业科学院家禽研究所，扬州 225125） 摘要：性成熟启动是一个复杂的生理过程，决定性成熟启动的关键性事件是下丘脑促性腺激素释放激素 （GnRH）脉冲式释放增加。 KISS-1 基因编码产物 kisspeptin通过其受体 GPR54能够直接刺激 GnRH释放， 进而启动性成熟进程，因此 KISS-1/GPR54系统被认为是性成熟启动的关键看门基因。禽类的 KISS-1基 因在 GenBank 中尚未被清晰注释。本文以文昌鸡为素材，通过比较不同物种 KISS-1 及其上下游基因在 染色体上的分布，确定了鸡 chr26:1522493-1532710 区域为候选片段，通过 PCR扩增和克隆测序获得了 该候选片段完整序列（称为类 KISS-1序列）。采用BLAST程序搜索出 9个同源性在 50%~85%的 EST序列， 通过拼接得到 3 个延伸 EST 序列。表达验证分析表明，3 个延伸 EST 序列在文昌鸡下丘脑组织中均有表 达。研究结果提示，KISS-1基因在禽类性成熟启动中可能也发挥重要作用。 关键词：性成熟启动；鸡；KISS-1 基因；EST序列 1、引言 性早熟在人类上表现为病理状态，而在动物生产上则是一个具有重要经济价值的性状。研究发现， 大量的功能基因参与了神经内分泌控制的性成熟启动过程，尤其是KISS-1/GPR54系统，被认为是性成熟 启动的关键看门基因（gatekeeper ）。然而，禽类的KISS1基因序列尚未被清晰注释，甚至被认为在进化过 程中丢失了。 我国地方鸡品种资源的早熟特性十分明显，如白耳黄鸡、济宁百日鸡、文昌鸡等开产日龄大都在 100~110天左右，比国外品种提前20天以上。开展鸡性成熟调节基因研究，对于高产蛋鸡和优质肉鸡育种 具有重要意义。本文拟采用基因组比较方法，克隆出鸡类KISS-1基因序列，为相关研究提供基础。 2、材料与方法 以国家级地方鸡种资源基因库保存的文昌鸡为实验素材，采集下丘脑组织，提取DNA 和 RNA 。根 据不同物种 KISS1 及相邻基因的分布设计引物（见图 1、表 1），PCR 产物回收纯化后克隆测序。 3、结果 设计的 4 对引物成功扩增出鸡 KISS-1 基因相应缺失序列 chr26: 1522493-1532710 。针对该缺失序列 搜索出 9 个相关 EST 序列（登录号：BU337828 ，BU298299 ，BU305010 ，AI980167 ，BU398959 ，CD740208， BU397302 ，BU303043 ，BU301557 ）。对其中3 个拼接延伸 EST 序列进行表达验证，结果在下丘脑组织 cDNA 样中均能扩增出产物，产物测序结果与各 EST 序列相一致。 *基金项目：江苏省家禽科学研究所青年基金项目（编号JQ201006）；国家自然科学基金项目（编 作者简介：韩威，男，1980—，在读博士，研究方向：家禽资源保护与遗传育种。E-mail: hanwei830@163.com 104 第十一届优质鸡的改良生产暨发展研讨会 海口 图1 不同物种 KISS1基因上下游序列比较 表1 缺失序列扩增及EST序列验证引物 类别 引物序列 染色体覆盖范围 KISS-F1：5 AAATGGTGACTTTGAGCGACT3