快速检测食品中磺胺二甲基嘧啶残留胶体金免疫层析方法建立.pdf

摘要 摘要 剂，常被用于预防和控制畜禽疾病。磺胺二甲基嘧啶及其代谢产物容易在动物肌 肉组织、脏器或其他可食性部分(如蛋、乳等)中蓄积，通过食物链进入人体， 给人类健康带来极大的危害。因此，加强兽药残留的监控和检测，建立一种快速、 简便的筛查方法具有重要的意义。本研究基于竞争抑制免疫层析原理，旨在建立 一种快速、简便的针对磺胺二甲基嘧啶残留的胶体金免疫层析方法。 通过应用胶体金免疫层析技术，将抗SM2单克隆抗体标记到胶体金颗粒上， 制备金标抗体；同时将制备的人工抗原SM2．BSA包被在NC膜上，作为检测线； 将驴抗鼠二抗包被在NC膜上，作为质控线。通过对SM2胶体金免疫层析试纸条 各项参数进行优化，确定最终工艺条件，成功建立快速检测SM2残留的胶体金免 疫层析法，并研制出SM2胶体金试纸条。SM2胶体金试纸条的生产工艺参数如下： 胶体金颗粒大小为40 am，抗体标记量为1．0¨eJmL，‘标记pH为7．0，抗原浓度为 0．5mpJmL，驴抗鼠二抗浓度为1．0m#mL。参照以上生产工艺参数，制各的SM2 胶体金试纸条的检测灵敏度可达10 min，检测范围为0～ ng／mL，检测时间为5 10000 ng／mL，且与磺胺甲基嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺甲噻二 唑及磺胺吡啶等8种磺胺类药物的交叉反应率较小。通过60℃加速保存实验，预 计该试纸条保质期为18个月。 以猪肉、猪肝、猪肾、鸡肉、鸡蛋、牛肉、鱼肉、虾肉及蜂蜜为实际样本进 行SM2的加标回收实验，以乙腈为提取剂，用磷酸缓冲液稀释一定倍数后可消除 基质影响，且在9种样品基质中的最低检出限均低于我国的限量标准(100 Bg／kg)。 本研究成功建立了磺胺二甲基嘧啶残留检测的胶体金免疫层析方法，并研制 出SM2胶体金快速检测试纸条。该方法具有灵敏度高、特异性强、操作简便、检 测时间短、成本低廉等优点，可适用于动物源性食品(如猪肉、猪肝、猪肾、鸡 肉、鸡蛋、牛肉、鱼肉、虾肉及蜂蜜等)中磺胺二甲基嘧啶残留的现场大批量快 速检测。 关键词：磺胺二甲基嘧啶；人工抗原；胶体金；免疫层析；试纸条 Ⅱ Abstract ABSTRACT for SulfadimidineiSoftenused the andcontroIofanumberof prevention diseases．Asa canbe infood of result，sulfadimidine veterinary present products animal residuesinfoodandanimaltissuesbe in origin．Sulfadimidine maypresent minuteconcentrationsbut ahealththreatto is maypose consumers．Therefore，it tOestablisha and methodforthe of important rapidsimple detectionsulfadimidine residuesinmeatand otheranim