绒毛膜癌氟尿苷耐药细胞系的建立及其胸苷合成酶的表达.pdfVIP

生堡坦亡叠盘盍!塑堡!!旦筮竺鲞筮!!翅曼蜘!Q墼堕Q翌趔：№咄2螋：!吐丝：坠!! ·851· ．基础研究． 绒毛膜癌氟尿苷耐药细胞系的建立及其 胸苷合成酶的表达 韩冰向阳沙桂华张浩刘欣 【摘要】 目的建立对氟尿苷(FUDR)耐药的绒毛膜癌(绒癌)细胞系，鉴定其生物学特性，并 探讨胸苷合成酶(TS)在绒癌FUDR耐药细胞中的表达。方法采用间断诱导法诱导绒癌细胞系 JeG-3，建立绒癌FUDR耐药细胞系JeG-3／FUDRA(诱导浓度为2．3×10一mo∥L)。倒置显微镜观察 细胞形态；活细胞计数(CCK-8)法观察敏感细胞和耐药细胞的生长和耐药指数；化学发光法测定培养 液中的激素水平；流式细胞仪检测细胞周期比例和染色体倍性；荧光定量PCR技术检测不同浓度 JeG-3／FUDRE)中TSmRNA的表达。结果(I)绒癌耐药细胞系JeG-3／FUDRA的建立及生物学鉴 定：历时10个月成功建立了绒癌耐药细胞系JeG-3／FUDRA，其耐药指数为31．62。与leG-3亲本细胞 相比，JeG-3／FUDRA耐药细胞的形态发生明显改变，细胞生长明显减慢(P0．05)，群体倍增时间明 显延长[分别为(27．4±0．8)和(47．3±2．1)h，P0．01]；G2／M期细胞比例明显下降[分别为(27± 0．01]；染色体数目明显增加[分别为(76±5)和(143±5)条，P0．01]；其培养液中人绒毛膜促性腺 激素(hCG)水平明显下降[分别为(29．1±9．9)和(8．9±0．9)mU／ml，P0．05]，孕酮水平明显下降 [分别为(31±8)和(16±3)ns／ml，PO．05]。(2)耐药细胞中ISmRNA的表达：经低浓度FUDR诱 导后，JeG-3／FUDRE细胞中TSmRNA的表达水平下调；随着FUDR诱导浓度的增加和作用时间的延 长，细胞中ISmRNA的表达水平逐浙恢复，其中JeG-3／FUDRC细胞中TSmRNA表达水平和JeG-3亲 本细胞比较，差异无统计学意义(PO．05)；而JeG-3／FUDRA细胞中TSmRNA表达水平则明显高于 leG-3亲本细胞(P0．05)。结论本研究成功建立了绒癌FUDR耐药细胞系JeG-3／FUDRA，随着 FUDR浓度的增加和作用时间的延长，其TSmRNA的表达有阶段性的差异。就本研究结果而言，TS mRNA表达水平的高低不适用于作为肿瘤是否对FUDR耐药的指标。 【关键词】绒毛膜癌；细胞系，肿瘤；氟尿苷；抗药性，肿瘤；胸苷酸合酶 Establishmentoffloxuridine-resistantsublineandtheroleof JeG-3 thymidylatesynthetasemRNA in HAN expressionchem·resistant-predictionB堍，XIANGYang，SHAGui—hua，ZHANGHao，UU Xia ofObstetricsand UnionMedical Union Departmem Gynecology，PekingCollegeH∞pilal，Peking Medical Medical College，ChineseAcademyof Sciences，BeingJ∞刀0，China author：XIANG Colirt Corresponding Yang，Email：xiangyan965@gmaiL To objeetiveestablishhumanchoriocarcinomaJeG-3cellline陀sistanttofloxufidine 【Abstract】 describethecharacter_istiCSofthisFUDR．resistantsubline．The (FUDR)and thymidylatesyntha船(鸭) in