稳心草黄酮类化合物对肺动脉平滑肌细胞增殖及其TGF-β表达影响的实验研究.pdfVIP

2011VoL18No．4 ·309· 中国中医药科技2011年7月第18卷第4期July 稳心草黄酮类化合物对肺动脉平滑肌细胞增殖 及其TGF—13表达影响的实验研究 薛国忠戴恩来△ 胡永鹏 丁 劲 张杰 (甘肃中医学院附属医院·兰州730020) 摘要 目的：研究稳心草黄酮类化合物对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMs)增殖和TGF—p表达水平的 影响，探讨其防治肺动脉高压的疗效及作用机制。方法：组织帖块法培养大鼠肺动脉平滑肌细胞，MTr法 确定高、中、低剂量分组及作用时间。MTr法进行细胞计数，流式细胞仪进行细胞周期测定，ELISA法进 行细胞培养夜TGF一13含量测定。结果：贴块培养的细胞经电镜鉴定为动脉平滑肌细胞；台盼蓝染色倒 置显微镜观察表明细胞生长状态良好。黄酮类化合物高、中剂量组细胞计数明显减少、细胞周期G0／G1 期细胞增多，S期、G2／M期细胞减少；细胞TGF—B含量明显降低，与空白对照组比较有统计学意义(P 0．05)；低剂量组与空白对照组比较无统计学意义(PO．05)。结论：稳心草黄酮类化合物可抑制大鼠肺 动脉平滑肌细胞增殖，延缓细胞周期进程，调节细胞分泌TGF—B水平。 主题词稳心草黄酮类化合物／药理学肺动脉平滑肌细胞／药物作用 体外研究 血管平滑肌细胞是构成血管壁组织结构及维持血管张 1．4仪器奥林巴斯IX71型倒置相差光学显微镜、日本 力的主要成分，其结构和功能的改变是导致多种心血管病的 细胞病理学基础。肺动脉高压血管重塑表现为血管壁增厚 和血管壁顺应性下降…。研究药物对血管平滑肌细胞的影 酶标仪：美国雷杜；IX；一5031型酶标仪：国营华东电子管厂。 8蹴m ， 响对肺动脉高压防治有重要意义。稳心草(Hyper／eura2方法 tenuatum Choisy．)是用于治疗心脏病的一种民间草药，具有2．1 血管平滑肌细胞培养方法采用Wistar大鼠动脉平滑 清热解毒、活血化瘀、化痰通乳的功效睥J。通过对慢性克山 肌细胞贴块法培养。按照文献方法¨’61进行原代及传代细 病的临床观察，发现稳心草在改善慢性克山病患者症状的同 胞培养。 时，还可使心功能获得不同程度的好转。研究发现稳心草全 2．2细胞鉴定 草中黄酮类化合物含量平均为1．67％【3J。具有提高机体免 2．2．1倒置显微镜观察细胞形状将培养瓶直接放在相差 疫力，促进机体代谢、强心、降压、利尿、抗菌、抗病毒、抗衰老 显微镜下观察平滑肌细胞形状、胞浆、胞质、核仁、细胞排列 及明显的耐缺氧作用H】。稳心草黄酮类化合物是否对动脉 形状等。 平滑肌细胞增殖和迁移具有一定作用目前还尚未见报道。 2．2．2电子显微镜超微结构分析培养的细胞经电镜放大 本文通过研究稳心草黄酮类化合物对体外培养的大鼠血管 平滑肌细胞增殖及其转化生长因子(TGF—B)的影响，初步 与培养液中其它非平滑肌细胞鉴别…。用生长良好的3—8 探讨稳心草治疗肺动脉高压的物质基础和作用机理，为进一 代细胞消化、吹打成悬浮液，离心、吸弃上清液，加入固定液， 步研究提供基础研究资料。 封口，置40C冰箱12小时后按照电镜常规标本制作方法制 1材料 成超薄切片，于透射电镜下观察并拍照。 1．1动物Wistar雄性大鼠，体重(180±20)g，甘肃中医学 2．3 实验药物浓度和时同确定采用四唑蓝(Mar)比色实 院SPF级实验动物中心提供。 1．2药物稳心草全草采自甘肃宕吕，稳心草黄酮类化合 物由甘肃中医学院生药研究室提取。 养，细胞贴壁后，分为不同剂