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ICS X DB42 湖 北 省 地 方 标 准 ×××—×××× 魔芋组培良种繁育技术规程 Technical rules for Tissue culture konjac super seed crom propagation 201×-××-××发布 201×-××-××实施 湖北省质量技术监督局 发布 ××/T××××—×××× 前 言 本标准由提出。 本标准起草单位：湖北省恩施土家族苗族自治州农业科学院本标准主要起草人：plant 由活植物体上下来以进行培养的组织或器官callus 将外植体放在适当的培养基上进行培养，器官或组织进行细胞分裂，形成新组织薄壁细胞团。tube plant 外植体在适合的光照、温度和营养激素等条件下，愈伤组织分化，产生出各种器官和组织，进而发育成的完整植株。光照、温度营养的具备的条件～采用培养基，配方与制作方法见附录A（规范性附录）。清洁、干燥、通风并经环境消毒的培养室，温度2℃～2℃，相对湿度65%～70%，培养30d～35d～～～～温度2℃～2℃，相对湿度65%～70%，～25℃左右、相对湿度65%～70%～～℃条件下催芽25～～～～后至魔芋成熟期前，喷施叶面肥 2-3 次，施复合肥 1-2 次。 温度要保持在13 -30 ℃ 以内，可用敌杀死进行杀虫若发现病株，立即将全株带土取出地外进行烧毁或深埋，同时用 1000 万单位农用链霉素兑水 液灌穴（软腐病），或在穴内及周围撒生石灰（白绢病），及时控制，防止漫延在进入 6 月份后，用农用链霉素每隔7 打一次，连续打3 次，以防软腐病、叶枯病等病害的发生要时拔除杂草拔草时应注意防止损伤幼苗。 ～附???录???A （规范性附录） ?培?养?基?  A.1 MS培养基母液的制备 A.1.1 贮备液Ⅰ：大量元素，包括N、P、K、Ca、Mg等五种元素，其化合物成分和用量如下： 成分 数量(mg/L) 成分 数量(mg/L) NH4NO3 16,500 MgSO4.7H2O 3 700 KNO3 19 000 KH2PO4 1 700 CaCl2.2H2O 4 400 配制方法：先分别称取以上数量的药品于100mL-500mL的烧杯中，分别加适量蒸馏水或纯净水溶解，其中NH4NO3和KNO3溶解时需吸热，冬季配制时可适当加温，MgSO4.7H2O难以溶解时可适当加温或加几滴1N的HCl溶液（如果仍不溶解，可能是因药品变质所导致，需弃去不用，另换新购买的药品），待所有药品都完全溶解后，转入装有约400mL蒸馏水的1L容量瓶中，边转边摇动容量瓶，使溶液稀释，以免发生沉淀。所有装溶液的烧杯均需用蒸馏水洗涤3-4次，洗液一并转入容量瓶。最后，用蒸馏水定容至刻度。 有时一次需配制大量母液（如10L、20L甚至更多），可将各种溶液分别定容至1L或2L，转入装有约1/4蒸馏水的容器中，将定容的溶液分别倒入该容器，每倒入一种溶液将容器摇动或搅拌，使其混合均匀，所有溶液均倒入该容器后，再用容量瓶添加不足的蒸馏水到需配置的容积后，充分混合均匀。采用该法需注意的是一定要记清每次添加溶液的数量。 母液配好后，要在试剂瓶上贴上标签，写明“MS大量元素、配制日期、配制人”等。使用时，每配制1L培养基用量筒量取100mL该贮备液。 A.1.2 贮备液Ⅱ：微量元素，包括Cu、Zn、Mn、Mo、B、I、Co等七种元素，其化合物成分和用量如下： 成分 数量(mg/L) 成分 数量(mg/L) KI 166 Na2MoO4.2H2O 50 H3BO3 1 240 CuSO4.5H2O 5 MnSO4.7H2O 4 460 CoCl2.6H2O 5 ZnSO4.7H2O 1 720 配制方法：先分别称取以上数量的药品于50mL-150mL的烧杯中（对于称量少于1000mg的微量元素，需用1/10000的电子分析天平，否则不容易称量准确），分别加适量蒸馏水或纯净水溶解，按大量元素一样的操作步骤定容到1L后，转入1L棕色试剂瓶中，贴上标签，保存在低温冰箱中，使用时每1L培养基吸取5mL该贮备液。 A.1.3 贮备液Ⅲ：铁盐，现一般用EDTA络合铁，能够适应pH5-8的培养物吸收，其化合物成分及其用量如下： 成分 数量(mg/L) 成分 数量(mg/L) FeSO4.7H2O 5 560 Na2.EDTA.2H2O 7 460 配制方法：在1/100的天平上先分别称取以上数量的药品于500mL的烧杯中，加适量蒸馏水，加热并不断搅拌使之溶解，然后将两种溶液混合把pH调到5.5，加蒸馏水到最终容积1L，贮备同微量元素。使用时每1L培养基