课程论文-葡萄逆境胁迫诱导型启动子的克隆.docVIP

青岛农业大学 ?本 科 生 课 程 论 文 题 目: 葡萄逆境胁迫诱导型启动子的克隆 姓 名: 刘丽雪 学 院: 生命科学学院 专 业： 生物技术 班 级： 学 号： 指导教师： 薛仁镐 完成时间： 2010.8.15 2010年8月20日 生物技术 刘丽雪 指导教师 薛仁镐 摘要：本文以葡萄幼苗为材料，依据基因组序列，设计引物，以基因组DNA为模板，利用PCR技术，对葡萄逆境胁迫诱导型启动子进行了扩增，获得了约1.4 kb的启动子序列，将启动子片段回收后连接到T载体，经酶切鉴定结果表明，所需启动子成功构建到T-A载体。葡萄逆境胁迫诱导型启动子的克隆对下一步抗逆调控分子机制研究及作物分子育种具有重要理论和实际意义。 关键词：逆境胁迫；启动子；PCR扩增；克隆  Cloning of Adversity Stress Promoter in Grapes Student majoring in Biotechnology Liu lixue Tutor Name Xue Ren-Gao Abstract: The promoter of gene was amplified by PCR technology using genomic DNA of grapes as template in this study. The 1.4 kb fragment of promoter was then ligated to the T cloning vector and confirmed by digestion with endonuclease and sequencing. Cloning of adversity stress promoter has important significance on molecular regulation mechanism of adversity and genetic breeding in crop. Key words: Stress tolerance；promoter；PCR amplification；Cloning  引言 葡萄（Vitis vinifera L.）在植物学分类中属于葡萄科(Vitaceae Lindley 或 Ampelideae Kunih)葡萄属(Vitis L.)的藤本浆果。葡萄科中有12个属，约600个种[1]。葡萄是最古老的被子植物之一，起源于欧、亚大陆和北美洲的连片地区。主要栽培类型则起源于中亚西亚一带，主要分布于世界的温带、亚热带、热带地区，主要野生于森林、山坡或河谷等地。葡萄科中只有葡萄属有较高的经济价值，并且得到广泛的栽培和较深入的研究。葡萄是一种营养价值较高的浆果，素有水果皇后的美誉，广泛应用于我们的日常生活中，它不但营养丰富、用途广泛：色美、气香，味可口，是果中佳品，既可鲜食又可加工成各种产品，如葡萄酒、葡萄汁、葡萄干等，而且果实、根、叶皆可入药，全身都是宝。是国际市场上重要的商品。 启动子决定着基因时空表达的特异性，目前通常采用分子生物学手段对生物反应器进行遗传改良，希望插入的外源目的基因能够限定在某一特定的组织或部位进行高效表达，在不影响该生物反应器其它特性的前提下，能够集中在靶组织方便地收集表达产物。植物启动子由核心元件和上游元件构成,如TATA-box和起始因子(initiator)。在逆境相关基因的启动子序列中还存在一些与逆境诱导相关，参与基因转录调控的顺式作用元件。目前研究较深入的有：脱落酸响应元件 [-8]、乙烯响应元件 [-8]、茉莉酸类物质应答元件[]、低温响应元件[12]和干旱应答元件[-6]等。ABA诱导裘达基因启动子存在一个PyACGTGGC保守序列，该序列在小麦胚胎发生晚期表达基因E3中首次被确定为ABA应答元俘，核心序列为A/GCGT。拟南芥RD29B基因启动子中存在两个ABRE，只有遮两个元件相置作用，形成ABA应答复合体，才能指导核心启动子的