罗格列酮对喉癌Hep-2细胞COX-2和NF—κB表达的影响。.pdfVIP

东医药2010年第 50卷第 1期 罗格列酮对喉癌 Hep一2细胞 COX一2和 NF—KB 表达的影响 张 勇 ．娄卫华h，张军辉 ，陈小兵 (1郑州大学第一附属医院，郑州450052；2河南省肿瘤医院) 摘要：目的 通过检测罗格列酮 (ROS)作用前后人喉癌 Hep-2细胞环氧化酶 (cox-2)和核因子．KB(NF．KB)表 达的变化情况，以探讨其抑制Hep-2细胞增殖作用的机制。方法 m-r法检测不同浓度 ROS处理不同时间喉癌 Hep-2细胞后细胞的增殖活性 ，制作细胞抑制曲线。RT-PCR检测ROS处理不同时间喉癌Hep-2细胞后细胞 COX． 2和NF-KBmRNA表达的变化。结果 ROS对人喉癌Hep-2的生长具有显著的增殖抑制作用，其作用表现为剂量 依赖性和时间依赖性(P0．01)。RT—PCR检测发现以50p,mol／L的ROS处理 Hep-2细胞COX-2和 NF．KBmRNA 表达显著下降，不同时间组间存在统计学差异(P0．01)。结论 ROS具有抑制人喉癌Hep-2细胞增殖的作用，其 作用机制与显著下调COX-2和NF-KB表达有关。 关键词：喉肿瘤 ；罗格列酮；Hep-2；环氧化酶；NF—KB 中图分类号：R739．65 文献标志码：B 文章编号：1002-266X(2010)01-OO4O-03 罗格列酮(ROS)属于噻唑烷二酮类 (TZD)胰岛 37℃，5％CO及95％空气饱和湿度的恒温培养箱 素增敏剂，通过激活过氧化物酶体增生物激活受体 中传代培养，取对数生长期细胞用于实验。ROS溶 -y(PPAR~／)而发挥治疗糖尿病 的作用。近年国内外 于DMSO配制成 100mmol／L的母液，过滤除菌后 一 研究报道 ，ROS通过激活PPA 对人白血病细胞和 20o=【备用。 多种实体瘤细胞具有明显的抑制增殖和诱导凋亡作 1．2．2 l岍 法检测细胞增殖抑制率 常规培养人 用 】。ROS作为一种具有 良好应用前景的抗癌药 喉癌 Hep-2细胞至对数生长期，胰蛋 白酶消化后吹 物，13益引起人们的重视，成为肿瘤研究的热点 】， 打制成单细胞悬液，计数板计数后用培养基稀释至 但ROS抗肿瘤的作用机理仍不清楚。为此，2009年 7．5×10个细胞／ml，于96孔培养板中按 100I*1／ 1—6月，本研究探讨了ROS对体外培养的人喉癌 孔细胞悬液接种，24h细胞贴壁后轻轻吸去上清， Hep-2细胞增殖抑制作用及对环氧化酶 (COX-2)和 加入含 ROS终浓度为 12．5、25、50、100pm．ol／L的 核因子一KB(NF—KB)表达的影响，旨在为其临床应用 培养基，同时设不含药物的正常对照孔、等体积的 提供一定的理论依据。 DMSO溶剂对照孔和空 白对照孔 (每组重复6孔)， 1 材料与方法 继续培养 12、24、36、48、60、72h，每孔加入 肌 ’溶 1．I 材料 人喉癌 Hep-2细胞株购 自南京凯基生 液20 l(5mg／m1)，继续培养4h，弃上清，每孔加入 物有限公司。RPMI1640购 自杭州吉诺生物医药技 150trlDMSO，振荡 10min充分溶解结晶后，用酶标 术有限公司。小牛血清购 自杭州四季青公司。酒石 仪于570nm下测定每孔的吸光度 (A值)，空 白对 酸ROS由河南辅仁药业集团有限公司惠赠。噻唑蓝 照孔吸光度值为调零孔，计算抑制率。以ROS作用 (Mar)、二甲基亚砜 (DMSO)和 z0l等试剂购 自 时间为横轴、抑制率为纵轴，绘制生长抑制曲线。 Sigma公司；逆转录试剂盒和dNTPmixture购 自宝生 ROS对Hep-2细胞的抑制率 (％)=(1一实验组A 物(大连)有限公司；TaqDNA聚合酶购自Promega公 值 ／对照组A值)X100％。同样实验重复3次。 司；DNA