猪繁殖与呼吸综合征病毒河北地方株ORF3基因的克隆及变异分析.pdfVIP

· 32· 试验研究 广东畜牧兽医科技 2010年(第35卷)第1期 猪繁殖与呼吸综合征病毒河北地方株ORF3基因的克隆及变异分析 王 娇，赵泽坤，王 坤，孙继国 e利 匕农业大学动物科技学院，河北 保定 071009 摘 要：从河北唐山分离到一株疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒，接种Marc-145细胞，经过4代盲传后， 出现细胞病变，经鉴定为PRRSV，命名为Ts株 根据GenBank公布的PRRSVJXA1株0RF3基因的核苷酸序 列，设计并合成一对特异性引物，用RT-PCR方法扩增完整0RF3基因，将扩增产物连接到pMD19一T载体并 转化克隆菌，将阳性重组质粒PMD-GP3进行序列测定与分析。应用DNAStar软件，将测序结果与国内外已 发表野毒株和疫苗株的0RF3基因进行序列比较，并绘制系统进化树。这为研制PRRSV新型疫苗及诊断试剂 奠定了基础。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；TS株；0RF3基因；变异分析 中图分类号 ：$856 文献标识码 ：A 文章编号 ：1005—8567(2010)01—0032一o3 CloneandvariationnaalysisofORF3geneofPorcineReproductivenad Rl(eesptirraattoorryySyndromevi’russsttrraaatinTSiissoollaatteeddftoomrrm HHeebbeelirdeissttrriicctt WangJiao，ZhaoZekun，WangKun，SunJiguo (CollegeofAnimalScienceandTechnology，AgriculturalUniversityofHebei，Baoding071001，China) Ab雹 ： OnePI SvirusstrainTSwasisolatedfrompigsofHebeiTangshanafterinoculatedtoMarc．145 cel1．Thefull-lengthofORF3geneofPRRSV strainTSwasamplifiedbvRT．PCRwithapairofspecificprime~ designedaccordingtotheORF3sequenceofPRRSV JXAlsrtain,andthenclonedintoplasmidpMD19-T．Th e recombinantplasmidnamedaspMD．GP3wassequencedandanalyzed．Thesequencewascomparedwim matof otherPRRSV strainsinGenBankbyusingDNAStarsoftwraeandthephylogeneticrteewasdrawn．Itlaidthe foundationforfurtherstudyforgeneticengineeringvaccineanddiang osticreagentforPRRSV． K~ words：Porcinereproductiveandrespiratorysynrdomevirus；strainTS；ORF3gene；VariationAn alysis 猪繁殖与呼吸综合征 (PorcineReproductive 视，对本病毒的研究也逐渐深入 。 andRespirationSyndrome，PRRS)是近年新发现 PRRSV为有囊膜 的单股正链 RNA病毒，基因 的一种 由猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)引起 组全长约 15kb。ORF3含有 765个核苷酸，编码的 的猪传染病 。该病 1987年在美 国北卡罗莱纳州首 糖蛋 白GP3，含有 254个氨基酸，具有 7个可能的 先发现n]，1991年荷兰首次从PRRS疑似病例中分 糖基化位点∞]。GP3是PRRSV中变异程度较高的蛋 离出一种定名为 Lelystad的新病毒 (LV)，并确定