复方肝毒清对铁超载肝星状细胞活化和凋亡的影响.pdfVIP

2010，11 {第27卷第 1期 广州中医药大学学报 JournalofGuangzhouUniversityofTraditionalChineseMedicine 3l January2010．Vo1．27，No．1 复方肝毒清对铁超载肝星状细胞活化和凋亡的影响 江 远 ， 张 玲 ， 何金洋 ， 郭兴伯 (1．广州医学院附属深圳沙井医院中医肝病科，广东深圳 518104 2．广州中医药火学热带 学研究所，广东广州 510405) 摘要：【目的】观察复方肝毒清对铁超载肝星状细胞 (HSC),-~4t和凋亡的影响 【方法】体外培养HSC—T6细胞，分为正 常对照组、模型组、q-药组 (给药浓度为O．08 L) 以柠檬酸铁胺 (FAC)与HSC—T6细胞共同温育，建立HSC铁超载模 型 采用免疫组化法检测HSC—T6细胞oc一平滑肌肌动蛋白 (d—SM )的表达，半定量聚合酶链反应 (PCR)法检测细胞转 化生长因子Bl(TGF一81)mRNA的表达，TUNEL法检测HSC—T6细胞的凋亡，电镜观察 HSC—T6细胞超微结构= 【结果】 正常对照组和模型组HSC-F6细胞 d—SMA大量表达，未见或仅见有较少细胞发生凋亡，而中药组HSC细胞 d—SMA表达明 显减少，TGF一61mRNA表达显著降低 (P0．05)，且出现明显细胞凋亡 【结论】中药复方肝毒清可能通过调节细胞铁的 代谢 ，抑制HSC,g4L并诱导其发生凋亡，从而在体外发挥抗肝纤维化作用 关键词：肝纤维4E／中药疗法； 复方肝毒清／药理学； 肝星状细 病理学； 肝星状细胞／超微结构； 细胞培养 中图分类号：R285．5 文献标志码：A 文章编号：1007—3213 (2010)O1—0031—05 铁超载与肝纤维化关系密切 。研究表明，铁可 解于培养 摹 中过滤，4~C保存 ，备片j：噻唑蓝 通过诱导肝星状细胞 (hepaticstellatecells，HSC) (M1丫r) 由吉泰 科 技 有 限公 司提 供 (批 号： 活化引起胶原沉积 ，从而导致肝纤维化的发生 ，鼠抗 d平滑肌肌动蛋 白 (o一【SMA，批 复方肝毒清具有抗 乙肝病毒 、保护免疫性肝损 号：BM0002)、山羊抗小 鼠IgG (SA1020)、二氨 伤 以及抗肝纤维化作用 ：既然 以扶正利湿解 基联苯胺 (DAB)显色试剂盒 (AR1022)、细胞 毒为治疗原则的复方肝毒清具有抗肝纤维化作用， 凋亡检测试剂盒 (MK1020)均 由武汉博上德公司 那么复方肝毒清能 抑制铁诱导的HSC活化，并 提供，转化生长因子B1(TGFt31)引物、鼠类 白 影响HSC的转归?本实验观察 了复方肝毒清对铁 血病病毒逆转录酶 (M—MLV逆转录酶)、脱氧核苷 超载 HSC活化和凋亡 的影响，旨在研究复方肝毒 三磷酸 (dNTP)、RNA酶抑制剂 (RNaseinhibitor) 清对肝纤维化的体外逆转作用 现报道如下 均购 自Fermentas公司，Mastermix荧光定 聚合 酶链反应 (PCR)试剂盒购于 日本 Toyobo公司， 1 材料与方法 TrizolRNA抽取试剂购于MRC公司。7300 荧光 1．i 细胞系 HSC—T6细胞为 SV40转染 SD大 鼠 定量 PCR仪购于ABI公司。 的刖：星状细胞系，其表型为活化的肝星状细胞，南 1．4 细胞毒性实验 (M1Tr比色法) 细胞按 1X 汪晓军胯上惠赠。 10／L密度接种于 96孔培养板 中，至细胞长满单 1．2 中药复方 复方肝毒清主要由白花蛇舌草 、 层后，弃培养液。FAC设 800、400、200、100、 三七、早莲草、太子参、自芍等8味中药组成，药 50、25、l2．5、6．25~mo