SARS-CoV棘突蛋白、核衣壳蛋白在E.coli中表达及免疫活性分析.pdfVIP

摘 要 Acute 2002年11月在我国广东省流行的“严重急性呼吸综合征”(Severe Respiratory 的时间里，就遍布于全球29个国家和地区，对全球经济发展造成严重的影响。SARS 的病原体是一种新的冠状病毒，世界卫生组织2003年4月16同正式将其病原体命 名为SARS冠状病毒(SARS—CoY)。 a， SARS—CoV是有包膜的正链RNA病毒，主要的蛋白质有RNA复制酶(复制酶I I protein)，膜蛋白M b)，核衣壳蛋白N(nucleocapsid)，棘突蛋白S(spike (membrane membrane protein)，小分子膜蛋白E(smallprotein)。该病毒至少有 结构蛋白区编码的最大的蛋白质，构成了病毒重要的抗原成分。N蛋白与病毒RNA紧 密结合，缠绕在病毒基因组的表面形成螺旋状核壳体，在RNA的转录和病毒的形态 发生过程中起着重要的作用。 本文通过对医务人员及SARS患者等进行跟踪调查，掌握了SARS在天津市流 行的一般情况，发病初期主要在医院内爆发流行，其中医务人员感染者多，比例高， 死亡天数与年龄成反变关系等，并对SARS流行特点进行了初步的分析。同时应用生 物信息学技术，界定冠状病毒sARs—CoVS蛋白和N蛋白的抗原决定区域，通过PCR SI、pET-Hs3、 扩增相应片段，克隆至原核表达载体pET-H，得到七个重组质粒pET-H pET-Hs4、pET-H 85、 转化大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导，pET-HS1、pET-Hs3、pET-Hs4、pET-H N4获得高效表达。表达产物经紫外薄层扫描显示目的蛋白占菌 pET-HN1及pET-H 体细胞总蛋白量的20一30％。经Westernblot检测，表达蛋白与恢复期SAILS病人血 清呈高反应原性。纯化相应蛋白免疫小鼠，所获抗血清效价达1：3×103。与SARS 诊断试剂反应呈阳性，这些工作将为进～步研究SARS的流行规律，S蛋白、N蛋白 的定位、功能及SARS的预防和诊断提供帮助。 关键词：SARS．冠状病毒(SARS．CoV)重组S蛋白 重组N蛋白 多 克隆抗体 天津市SARS流行一般情况 Abstract Acute is in Syndrome)，which SARS(SevereRespiratory epidemicGuangdong ProvinceinNovemberanacuteinfection human 2002，is lifeandhealth jeopardizing thefirstcasewas hadbeenfoundedin29countiesalloverthe seriously．After reposed，it worldinhalf and seriouseffect．onthe of only year produced developm