蛋白质微阵列生产用琼脂糖修饰玻片制备条件优化.pdf

中文摘要 中文摘要 蛋白质微阵列生产用琼脂糖修饰玻片制备的条件优化 东南大学医学院附属中大医院肾内科 研究生金世辉 导师刘必成 目 的：蛋白质微阵列载体的选择和表面修饰是影响微阵列质量的关键因素之一，蛋白 质微阵列载体不但要能固定足够量的蛋白质还要使固定在其表面的蛋白质保持天然活 性。在过去的研究中发现，琼指糖膜具有三维多孔结构，经过水化后在其内部形成丫固 ．液状态的水凝胶结构，这种三维、多孔结构以及湿润的微环境不但能固定足够的蛋白 质同时呵以防止蛋白质变性失活。该实验的目的就是以琼脂糖修饰的玻片作为蛋白质微 阵列载体，建立一种以琼脂糖修饰玻片为载体的蛋白质微阵列制备的优化方法。并比较 琼脂糖修饰玻片和醛基修饰玻片以及氨基修饰玻片对蛋白质固定效率的优劣。 方法：配制不同浓度的琼脂糖溶液，加热沸腾后铺在洁净的玻片上，烘箱烤干后制成 微阵列载体。将羊IgG固定在经过活化的载体表面，经过洗涤、判闭，再加入cy3标记 的兔抗羊IgG，孵育，洗涤后用共聚焦激光扫描仪获取图像，检测各点的荧光强度，根 据荧光强度确定最佳琼脂糖浓度，最佳Nal04浓度，最佳固定时间以及封闭时问等实验 条件，并和醛基修饰表面以及氨基修饰表面进行比较。 为45分钟时，蛋白质在载体上的固定效率和反应活性最高。在固定的抗体浓度相同的 情况下琼脂糖修饰玻片荧光强度是醛基修饰玻片的2．6倍，是氨基修饰玻片的9倍。 结论：本实验确立了蛋白质微阵列生产用琼脂糖修饰玻片制各的优化条件，用该优化条 件制备的琼脂糖玻片更适合用于蛋白质微阵列载体。 关键词： 蛋白质微阵列；载体；琼脂糖。 1l 英文摘要 Abstract English PREPARATIONCONDITIONOF 0PTIMIZING0FTHE FORTHE MODIFIEDGLASSSLIDE AGAROSE 0FPROTEINMICROARRAYS PRODUCTl0N of Da SchooI Institute UniVersity Nephrology，ZhongHospital，Southeast of Medicine，Nanjing，210009，China Candidate：JINShi-hui LIU Supen，isor：ProfessorBi—cheng biomoleculesisa factorin the 0BJECTIVEE伍ciemirmobilizationof key determining a11d successofa ofthe arebasedonsurfaccs overall proteinmicr()array．Mostmicma盯ays fomlatsthathavebeenusedforDNA Glassslidescoated