植物组织中糖与糖醇乙酰化及毛细管气相色谱分析.pdfVIP

植物学通报 2004, 21(6): 689~699 Chinese Bulletin of Botany 技术与方法 植物组织中糖与糖醇乙酰化及毛细管 气相色谱分析① 1,3 2 1,3 1 1,3 1,3 ② 胡 磊 郭 蓓 陆 海 邹祥旺 李 悦 蒋湘宁 1 2 (北京林业大学生命科学与技术学院 北京 100083)(北京农学院生物技术系 北京 102206) 3(国家林业局树木花卉育种生物工程重点开放实验室 北京 100083) 摘要 介绍了一种用1-甲基咪唑为溶剂和催化剂、盐酸羟胺和乙酸酐为肟化和乙酰化试剂，对植物样 品中糖与糖醇进行乙酰化衍生化后的气相色谱分离和质谱鉴定的分析方法。并对糖与糖醇乙酰化影响较 大的反应温度、反应时间、反应物组成和反应物浓度等条件进行了比较研究，确定了糖与糖醇乙酰化各 步反应的最佳反应温度和反应时间，分析了各组分间相互作用及其用量对衍生化效率的影响。对多种糖 与糖醇乙酰化产物进行毛细管气相色谱分离、FID检测及GC-MS结构鉴定。研究证明,在合适条件下应 用此方法对糖与糖醇进行乙酰化，反应完全，产物单一，能得到理想的分离、检测和定量分析效果。适 用于微量植物组织中多种单糖、双糖及其糖醇的定量分析。 关键词 甲基咪唑1-,糖与糖醇,乙酰化,气相色谱,气质联用(GC-MS) 1,3 2 1,3 1 1,3 1,3 ② HU LeiGUO BeiLU HaiZOU Xiang-WangLI YueJIANG Xiang-Ning 1(College of Life Sciences and Biotechnology, Beijing Forestry University, Beijing 100083) 2(College of Biotechnology, Beijing Agriculture College, Beijing 102206) 3( , Beijing 100083) Abstract ①国家重大基础研究973项目(G1999016005)资助。 ②通讯作者。Author for correspondence.jiangxn@bjfu.edu.cnE-mail: 收稿日期：2003-09-22接受日期：2004-07-22责任编辑：白羽红 690 21(6) Key words 单糖、双糖及其糖醇广泛存在于自然界各种生物中。植物体内的糖醇具有提供能量、清 除多余自由基和调节植物细胞渗透压从而提高植物抗逆性等生理功能(Loescher, 1987)。许多学 者试图阐明糖醇类物质与植物抗逆性的相关性及其作用机理。但是植物组织中糖醇类物质浓度 相对较低，采用一般的粗测定的方法很难得到其准确含量，因而很有必要建立一种快速且灵 敏的糖醇类物质分析方法。 采用毛细管气相色谱法测定糖与糖醇具有速度快、分离效果好以及灵敏度高等优点。在 气相色谱分析之前，需将糖与糖醇制备成易挥发且热稳定的衍生物。常用的衍生化方法有三 甲基硅烷化(TMS)、甲基化和乙酰化，这3种方法各有利弊。TMS化方法简便，成本低廉， 但其衍生化产物分子量大，往往会影响分离效果(苏桂琴等, 1988)。而且TMS化对无水条件要 求较高，产物极易水解。糖与糖醇甲基化衍生是可行的，但分析特异性低，对于某些物质 的分离效果不理想(方一苇, 1994)。糖和糖醇经乙酰化后分子量适中，对一些常见的糖类物质 均能有效分离，但目前在制备糖腈乙酯时人们多用吡啶作溶剂，反应耗时太长(李铁林等, 1981)。用1-甲基咪唑作溶剂和催化剂，衍生化反应仅需10 min即可结束(Chenet al., 1981)， 而且花费不高，前人在不同衍生化条件下应用过此法(Chenet al., 1981;王慧中等, 2000)，