米曲霉高产酸性蛋白酶菌株的选育.pdfVIP

中 目 调 味 品 2010年第 1期 CHINA C0NDIMENT 试验研究 总第 35卷 米 曲霉高产酸性蛋白酶菌株的选育 邓静，徐静，吴华昌，石岩 昌 (四川理工学院 生物工程学院，四川 自贡 643000) 摘要 ：用 2 的纤维素酶 ，35℃下水浴酶解 3h制得米曲霉部分去壁孢子 ，以它为诱变对象对其进行 Licl-微波，DES-超声波复合诱变，并利用酪蛋 白平板初筛，三角瓶 固体培养测酶活复筛。最终选 出1株 高产酸性蛋白酶的茵株 C2，其产酸性蛋 白酶活力是原始茵株的 135．O 。 关键词：米曲霉 ；复合诱变；酸性蛋 白酶 中图分类号 ：TS201．3 文献标识码 ：B 文章编号 ：1ooO一9973(2010)01--0053--03 ScreeningofacidprOtease-OVerprOducingstraninsofaspergillusoryzae DENGJing，XUJing，WU Hua—chang，SHIYan-chang (SchoolofBioengineering，SichuanUniversityofScienceandEngineering，Zigong643000，China) Abstract：Thesporeswithpartlycellwallofaspergillusoryzaewereusedastheexperimentaleateria1． Thesporeswasincubatedat35℃ for3hourswith2 cellulose．ThenLicl—M icrowave，DE-SUltra— soniconthesporeswerecarriedout．Finally，onehighacid—proteaseproducingmutantczwas screenedoutbycasein-degradatingplateexperimentsandcalculatedacid— proteaseactivity．Theacid— proteaseactivityofC2is135．0 oftheoriginalstrain． Keywords：aspergillusoryzae；compoundmutation；acid-protease 米曲霉具有酶系丰富，产蛋 白酶的酶活高，生长 接触面积大 ，可以与诱变剂充分 的接触[3]。但原生质 快，适应能力强，不产毒素等特点，因而广泛用于酱油 体的制备和再生条件都比较苛刻，而且普遍存在再生 生产 中以形成独特 的色，香，味，体[1]。现有的米曲霉 率较低的问题，因此为了克服上述问题，考虑采用纤维 菌株主要是产 中性蛋 白酶和碱性蛋 白酶 ，产酸性蛋 白 素酶处理孢子，得到部分去壁的孢子，利用这部分去壁 酶的能力较低 ，在生产过程 中，随着发酵过程的进行 ， 的孢子作为诱变出发材料，不仅具有原生质体诱变 的 固体培养基的pH要降低 ，导致蛋 白的水解速度减慢 特点 ，而且很容易再生无需做再生实验 ，简化了原生质 甚至终止[23，使发酵过程不彻底 ，不利于生产。因此设 体诱变育种的流程 。 法选育出酸性蛋 白酶的高产菌株，以完善米 曲霉的固 1 材料与方法 体发酵过程具有重要意义。传统育种多采用诱变剂直 接对米 曲霉孢子或菌丝体进行处理，由于孢子壁较厚， 1．1 材料 因此诱变效果不佳，而用菌丝体诱变又容易造成遗传 米曲霉 四川理工学院微生物实验室保存 ，酪蛋 的不稳定性和筛选的困难 。 白，纤维素酶，硫酸二 乙酯 ，Licl，800W-2450MHz的 现在原生质体诱变技术 已广泛应用于工业微生物 DS023CTL-K4型微波炉，200W-50kHz超声波清洗