凋亡相关基因-Bax在不同细胞中表达产物差异检测.pptVIP

凋亡相关基因－Bax在不同细胞中表达产物差异检测 实验（1） 原 理 免疫细胞化学（免疫组化）是将抗原、抗体间的免疫反应引入细胞标本，并通过对其所带有的特殊标记物的显示，籍以对细胞内某抗原或抗体作定性、定位以及定量检测。 亲和组织化学：则将一些具有双价或多价结合力的物质(生物素)，应用于免疫组化，使得抗原抗体的亲和力比免疫组化高出100万倍。其更具高灵敏性和高特异性。 原 理 Bax—— 凋亡相关基因 Bcl-2家族成员 细胞损伤时其蛋白构象发生改变（寡聚化） 作用线粒体膜，使其膜通透性增加，释放Cytc，细胞凋亡 原 理 本次实验以Bax构象蛋白为抗原，用小鼠特异性抗体（一抗）与其结合，再用生物素标记的羊抗小鼠抗体（二抗）与前者结合，形成了生物素复合物。 此复合物与SABC作用，使得检测物被放大，最后在显色剂DAB的作用下，Bax构象蛋白显色（褐色）。 器材与试剂 仪器：移液枪、枪头、滴管、显微镜 材料：培养细胞 试剂：甲醇、PBS、封闭液、一 抗、 二抗、 SABC、DAB 、0.3％H2O2-PBS、 试 剂 说 明 PBS： 磷酸盐缓冲液（ 0.01M pH7.4 ） 封闭液： 山羊