未成熟新生大鼠HI后脑组织VEGF表达和血管新生研究.pdfVIP

未成熟新生大鼠HI后脑组织VEGF表达和m管新生的研究 未成熟新生大鼠…后脑组织VEGF 表达和血管新生的研究 中山大学附属第一医院儿科 硕士研究生：张 程 导 师：庄思齐教授 摘 要 [目的】 探讨未成熟新生大鼠HIBD模型中脑组织VEGF表达和新生血管形成的 情况，探讨丹参对此模型VEGF表达和新生血管形成的影响。 [材料与方法] 1．实验动物及分组 ’ 3，P3)SD大鼠(早产组， 64只体重7～109新生3日龄(postnatalday 限。 2．动物模型的建立及用药 P3新生大鼠经结扎左侧颈总动脉及吸入6％浓度的氧2h制作早产HIBD 模型；P7新生大鼠经结扎左侧颈总动脉及吸入8％浓度的氧2h制作足月HIBD 模型；假手术组仅游离左侧颈总动脉而不结扎不缺氧。 丹参组术前24h及HI后即刻腹腔注射丹参注射液(早产0．06ml，足月 来成熟新生火鼠HI后脑纰织VEGF表达雨…【管新生的研究 次。对照组大鼠在同时问注射等量生理盐水。 3．脑形态组织学检查 术后1d、3d、7d时各组分别处死4只大鼠，脑组织于10％中性甲醛固定。 观察缺氧缺血前后动物行为改变及脑形态学改变。 4．免疫组织化学染色和量化 脑组织石蜡切片行免疫组织化学染色，以VEGF小鼠抗大鼠lgG单克隆 抗体标记VEGF，采用全自动图像分析系统分析VEGF阳性单位表达的灰度 值；以CD31兔抗大鼠IgG多克隆抗体标记微血管，高倍镜下计数热点区微血 管数。 5．R1乙PCR 丹参组和对照组于术后1d、3d、7d时各处死4只大鼠，取缺氧缺血侧脑 和正常值(假手术组)比较。 6．统计学分析 结果以均数±标准差(X!s)表示。各组数据采用析因分析，同一天组间 均数比较采用单因素方差分析，p0．05为差别有统计学意义。 [结果] 1．新生大鼠ItlBD模型的表现和病理改变 所有HIBD模型组大鼠均有躁动、发绀、嗜睡、易激惹等表现，复氧后足 月组出现平衡异常及左旋现象，爬行时右后肢呈拖步，睁眼后左眼眼裂比右 眼眼裂小：早产组也有平衡异常，但其他表现少见。形态学检查见左大脑皮 质神经元细胞水肿、变性、坏死、核固缩，胶质细胞增生；早产：组还¨丁见白 质水肿，结构疏松；丹参治疗组水肿变性等改变均较对照组轻。 2．脑组织VEGF免疫组化染色结果 正常新生大鼠和HIBD模型组大鼠在神经元、内皮细胞、软脑膜细胞、胶 质细胞等均可见VEGF表达。各处理组之间总的VEGF表达有统计学差异(F Il 来成熟新生大鼠m后脑组织VEGF表达和血管新生的研究 组假手术组。P3对照组皮质VEGF表达HI后第ld、3d和假手术组差别有 统计学意义(17．40+3．64 VS．10．51±1．53， VS．13．13+1．33，pO．01；13．81±1．38 VS． 13．81±1．38，22．12±1101 VS．11．27±1．01， 达HI后第1d、3d和假手术组差别有统计学意义(17．39+2．56 pO．01；16．00±1．61 VS．11．42±1．99，pO．01)，治疗组均值大于对照组，但差 别无统计学意义。白质各组问差别无统计学意义。 3．脑组织新生血管的形成 P3、P7假手术组皮质