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- 2018-04-02 发布于重庆
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DNA序列分析[本章摘要]??? ????DNA 的序列分析有两种基本方法, Maxam-Gilbert 化学降解法和 Sanger 氏酶学法。因为测序每个反应读取的序列是有限的,做长片段 DNA 或基因组测序时,需要选用一定的策略。测序的策略有 primer walking ,随机测序,定向测序等。现在全自动测序仍然沿用 Sanger 氏酶学法,但是在标记上作了改进。 DNA 测序结果通过生物信息学分析,获取需要的信息。第一节 Maxam-Gilbert 化学降解法
1977年, A.M. Maxam 和 W. Gilbert 首先建立了 DNA 片段序列的测定方法,其原理为:将一个 DNA 片段的 5 端磷酸基作放射性标记,再分别采用不同的化学方法修饰和裂解特定碱基(表 6-1),从而产生一系列长度不一而 5 端被标记的 DNA 片段,这些以特定碱基结尾的片段群通过凝胶电泳分离,再经放射线自显影,确定各片段末端碱基,从而得出目的 DNA 的碱基序列。 Maxam-Gilbert 化学降解法测序原理如图 6-1 : ??????????????????表6-1:Maxam-Gilbert化学降解法测序的常用化学试剂:
碱基体系 化学修饰 试剂 化学反应 断裂部位 GA + GC + TCA C dimethyl sulphate(硫酸二甲酯)P
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