- 1、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
优秀硕士毕业论文,完美PDF格式,可在线免费浏览全文和下载,支持复制编辑,可为大学生本专业本院系本科专科大专和研究生学士硕士相关类学生提供毕业论文范文范例指导,也可为要代写发表职称论文提供参考!!!
酪蛋白/巨细胞病毒(CⅢ)复合启动/增强子指导
人乳铁蛋白cDNA表达的研究
摘要
转基因动物乳腺生物反应器为获得高质量、低成本的药用重组人乳铁蛋白提
供可能。但是,入乳铁蛋自在转基因动物乳腺中仍多处于较低水平表达.为此,
本研究构建了一对乳腺特异性表达载体,制备了转基因小鼠,通过比较两种不同
构件(即是否含有CMV增强子部分),探讨添加CMV增强子对于提高人乳铁蛋
白乳腺特异性表达水平的作用;并且摸索在个体水平筛选转基因高表达个体的方
法。
本研究之构建选用牛asl-酪蛋白的调控序列,包括长2264bp5’端调控区,即
bp到.6264
sl一酪蛋
质粒(实验室保存)获得hLFeDNA片段(约2.3kb),共同构建了由牛a
白5’端+bLF
牛as1.酪蛋白5’端+增强子片段+hLF
白eDNA乳腺特异表达载体AP。
法将表达载体片段导入小鼠受精卵雄原核,注射后存活卵数(移植数)630枚,移
植受体数37只,受体怀孕数13只,获得出生仔鼠51只,受精卵存活率为42.3%;
j
AF构件的质粒用上述同样方法处理后,制备转基因小鼠,获得受精卵851枚,通
过原核显微注射法将表达载体片段导入小鼠受精卵雄原核,注射后存活卵数(移
卵存活率为57.6%。
转基因整合率为3.9%。转基因原代小鼠与正常小鼠交配,获得Fl代整合小鼠5
只,F2代整合小鼠7只,建立人乳铁蛋白转基因小鼠品系。
采用酶联免疫法(ELISA Blot)对AP原代转基
assay)和蛋白印迹(Western
因小鼠及其后代的乳汁表达水平进行检测。ELISA检测结果表明:在AP转基因原
代小鼠和Fl、F2代乳汁中人乳铁蛋白表达均呈阳性,其中原代表达量约在
Blot结果表明:转基因小鼠乳清检测有与标准人乳铁蛋白带相
3--69·L.I。Western
一致的条带。此外,转基因小鼠血液、泪液的ELISA检测结果显示,所构建的表
达载体具有乳腺特异性。对AF转基因小鼠乳汁收集,送至江苏省原予医学研究所
检测,检测结果实验室保存。
通过近交筛选,获得AP转基因纯合子小鼠(辛38’、d3矿),催乳获得小鼠乳
汁,ELISA检测乳汁中入乳铁蛋白有较高表达量。同时利用本实验室已获得的
双重杂合子小鼠。
比较AF与AP,后者在前者的基础上增加了CMV增强子;在转基因小鼠个
体表达水平上,后者明显高予前者。此试验结果证实了我们的设想,即牛的Qsl一
酪蛋白调控序列与CMV增强子复合启动子构建乳腺特异性表达载体,能够大大提
高人乳铁蛋自eDNA的表达。本实验还表明,我们所构建的人乳铁蛋白乳腺特异
性表达载体具有很好的乳腺组织表达特异性。同时,转基因小鼠纯合子的筛选,
也为我们缩短制备转基因大动物的周期提供理论依据。
s1.酪蛋白、人乳铁蛋白、转基因小鼠
关键词:CMV、乳腺生物反应器、牛a
Studieson ofhuman-lactoferrincDNAunder
expression gene
the of asl
bovinecasein/CMV
multiplepromoter/enhancer
Abstract
scientiststo
devoted bioreactorofhumanlaetoferrin
Many mammarygland
study
by alIin
您可能关注的文档
- 金华猪六个基因的多态性及效应研究.pdf
- 金荞麦(Fagopyrum+dibotrys(D.Don)Hara)模拟逆境下的生理和形态适应性及开花物候与研究.pdf
- 金沙江中游干热河谷植被类型特征及演变关系研究.pdf
- 金银花复方制剂的质量控制方法与研究.pdf
- 近红外及拉曼光谱多元校正方法与研究.pdf
- 京海黄鸡球虫抗性相关参数及选育与研究.pdf
- 京津冀地芡叶蜂分类与区系与研究.pdf
- 精液白细胞与男性不育关系与研究.pdf
- 颈髓MRIT2高信号强度及范围与脊髓型颈椎病临床表现的相关性与研究.pdf
- 开缝圆肋传热性能数值与研究及场协同原理分析.pdf
- 雷沙吉兰对乳胞素诱导PD大鼠模型的神经保护作用及机制与研究.pdf
- 类风湿关节炎滑膜Foxp3-%27%2b-调节性T细胞浸润的临床相关性与研究.pdf
- 冷地早熟禾和中华羊茅种子丸粒化技术与研究.pdf
- 梨园节肢动物群落动态分析及害虫与天敌之间的关系与研究.pdf
- 李园节肢动物群落动态及主要害虫天敌相互作用与研究.pdf
- 利用测序水稻品种构建重组自交系群体及SSR遗传连锁图谱的初步制作与研究.pdf
- 荔枝花芽生理分化期气象条件的影响与研究.pdf
- 连香树(Cercidiphyllum+japonicum+Sieb.et+Zucc.)种群生殖生态学与研究.pdf
- 梁山慈稳态营养与高效施肥技术研究.pdf
- 两种钙钛矿结构混合导体材料的制备及电学性能与研究.pdf
最近下载
- 学堂在线 实用绳结技术 期末考试答案.docx VIP
- 风力发电技术的发展现状和未来发展趋势.pptx VIP
- 医疗行业数据脱敏技术方案.docx VIP
- 新译林九年级上Unit 4 精选短语和词汇(预习+复习+默写)2024-2024学年牛津版英语九年级上册.docx VIP
- DB14T 3225-2025煤矸石生态回填环境保护技术规范.docx VIP
- 精品解析:辽宁省沈阳市第四十三中学2024-2025学年八年级上学期期中考试 数学试题(原卷版).docx VIP
- 中医内科学中风(共42张PPT).pptx VIP
- 探究与实践++湖泊生态环境治理与保护+课件-2025-2026学年八年级地理上学期湘教版(2024).pptx VIP
- 医疗器械经营质量管理制度及工作程序.docx VIP
- 额定电压110 kV(Um=126 kV)交联聚乙烯绝缘电力电缆及其附件 第1部分:试验方法和要求.pdf VIP
文档评论(0)