溶藻弧菌噬菌体、菌影疫苗及对对虾免疫保护性的比较与研究.pdfVIP

溶藻弧菌噬菌体、菌影疫苗及其对对虾免疫保护性的比 较研究 摘要 本论文从自然环境中分离，筛选了一株致病弧菌，经鉴定为溶藻弧菌，并同时从 环境当中分离了它的噬菌体。本文研究了噬菌体的生理特性，制作溶藻弧菌茵影。并 利用全菌疫苗，菌影疫苗及噬菌体注射对虾，比较它们对南美白对虾免疫功能的影响 和对对虾溶藻弧菌弧菌病的防治效果。 具体研究结果如下： 1．本文从虾塘水体中分离了一株溶藻弧菌，对该菌进行了常规的生理生化鉴定，确认 该菌为溶藻弧菌； 2．以分离到的溶藻弧菌为宿主菌从虾塘水体中分离了一株溶藻弧菌噬菌体。平板上噬 菌斑特征：噬菌斑较为透明，圆整，边缘清楚，无晕环。噬菌斑较小，直径为1．0～ 1．2mm。进行扩增之后该噬茵体的最高效价可达1010pfu／mL； 3．测定了溶藻弧菌噬菌体的生理生化特性，实验结果表明：噬菌体的RTD为 106pfu／mL。最适pH为8．0，太酸或者太碱的环境都不适合噬菌体的生存；最适温度 为35℃，具有有较好的耐热性，对60。C以上的温度敏感；对紫外线敏感，溶藻弧菌 和噬菌体混合时间影响出斑数量；该噬菌体对氯仿不敏感，但其对非离子去垢剂 出斑率高出55～71个百分点。在盐度为25％o的情况下，对溶藻弧菌的裂解能力最强， 这可能是因为这株噬菌体是在海水环境下分离出来的有关，所以对于高盐度的耐受性 比较好；该噬菌体的最佳感染复数为在0．1～10之间；噬菌体的潜伏期为35mira 4．本文探索了如何能用噬菌体尽量完全的裂解宿主，由实验结果可以看出：溶藻弧菌 的培养时期对于噬菌体的除菌效果是有影响的，噬菌体对于培养了2小时到8小时之 间的宿主菌的裂解能力相当，宿主菌数量的变化规律也一致，都是刚开始有微弱的升 高，到了4小时以后开始下降，6小时后下降更加明显，当达到一个最低点后，又有 升高；噬菌体对于培养了lO个小时的菌的裂解能力相比培养了2小时到8小时之的 菌的裂解能力有所降低，在噬菌体和宿主菌反应时间到10小时时，菌的数量就达到 了最低值，但这个最低值高于噬菌体和培养了2小时到8小时之间的宿主菌相互反应 所达到的最低值；用培养时期在12小时以后的溶藻弧菌作为宿主时，结果发现噬菌 体对菌的数量变化作用比较小。菌数量的变化曲线接近于菌的生长曲线；但当噬菌体 数和溶藻弧菌数之间的比不同时，弧菌的数量变化规律也不同，当弧菌数量比噬菌体 数多时，菌数量是先呈现上升趋势，然后下降，再上升；当噬菌体数量比较多时，菌 的数量先下降，后缓慢上升，当MIO=10时，除菌效果最好，噬菌体数和溶藻弧菌数 之间的比对除菌效果影响不是很大，只是会导致到达菌数量最少的时间点不同； 5．实验结果发现在实验室中，噬菌体不能完全裂解细菌，使用1001a,L的大蒜液或浓度 净； 6．用溶藻弧菌对南美白对虾进行攻毒实验。结果表明，肌注射l×106cfu／mL的溶藻弧 菌可以使对虾的死亡率达到30％，而l×107cfu／mL的溶藻弧菌可导致成虾红体病， 1×108cfu／mL的溶藻弧菌可使对虾的死亡率达到90％。各实验组凡纳滨对虾的各部分 的弧菌含量都远比对照组高，肝胰脏和肠内的含菌量尤其多；对虾的血细胞数目呈升 高趋势； 7．本实验给南美白对虾注射甲醛处理的全菌疫苗，噬菌体处理的菌影疫苗和噬菌体， 比较三者对对虾的免疫学指标的影响。经噬菌体处理过的菌影疫苗注射的对虾的 NOS活力最高，注射噬菌体对NOS活力的影响不是很明显，甚至低于阴性对照组； 菌体的南美白对虾的血蓝蛋白在6h的含量最高； 8．免疫后攻毒实验结果可以看出，108pfu／mL噬菌体对南美白对虾的免疫保护率最好， 可以达到88．2％，随着浓度的降低，免疫保护率也随之下降，但106pfu／mL的噬菌体 影疫苗的免疫保护率也有76．5％高于108的全菌疫苗。 关键词：溶藻弧菌，噬菌体，南美白对虾，全菌疫苗，菌影 II effect on of Comparisonimmunoprotective ofVibrio andvaccinesof bacteriophages