变形杆菌质粒介导的喹诺酮耐药基因的检测.pdfVIP

JournalofClinical 93 临床检验杂志2008年第26卷第2期ChineseLaboratoryScience，2008，V01．26，No．2 中图分类号：R446．5 文章编号：1001-764X(2008)02-0093-03 文献标识码：A 。记者‘ 变形杆菌质粒介导的喹诺酮耐药基因的检测宰 陈晓莉。，李涛茸，徐元宏‘一，黄颖6，储洁9，熊自忠。(安徽医科大学a．临床检验诊断学教研室，b．第一附属医院检验科，c． 第一附属医院传染科，合肥230022) 摘要：目的 杆茵的qnr基因。药敏试验用M-H肉汤微量稀释法。结果 茵中的携带率较低。 关键词：喹诺酮耐药基因；变形杆茵；喹诺酮类；耐药 变形杆菌对喹诺酮类药物的耐药机制，主要为 司)，头孢噻肟(湘北威尔曼制药公司)，头孢吡肟、 喹诺酮类药物靶位的改变，过度产生的多重耐药溢 氨曲南(上海施贵宝制药公司)，庆大霉素、阿米卡 出泵和外膜通透性降低。这些机制均由染色体介 星(上海第一生化药业公司)，亚胺培南(杭州默沙 导，不会发生耐药基因的水平传播。近几年在大肠 东制药公司)。环丙沙星、左氧氟沙星、诺氟沙星、 埃希菌和肺炎克雷伯菌对氟喹诺酮多重耐药株中发 氧氟沙星、加替沙星标准品购自中国药品生物制品 现了质粒介导的耐药决定基因(qnr)…。本研究对检定所，萘啶酸标准品购自PanyaChemical公司。 近2年临床分离的变形杆菌进行qnr基因筛查，以1．5 ESBLs及MIC检测用头孢他啶和头孢他 了解其存在情况。 I影克拉维酸、头孢噻肟和头孢噻肟／克拉维酸纸片 1材料和方法 1．1菌株来源收集2004—2006年安徽省细菌耐产品。最低抑菌浓度(MIC)测定采用微量稀释法。 药监控41家网络医院分离的146株变形杆菌(无重质控菌株为大肠埃希菌ATCC 复株)。其中奇异变形杆菌122株，普通变形杆菌验和微量稀释法药敏判断标准按CLSI／NC． 19株，潘氏变形杆菌5株。标本取自尿、痰、创面分 C【sMl00-$16规定¨o。 泌物等。 1．6 DNA模板的制备采用煮沸法制备模板。 1．2试剂引物由上海生工公司合成；TaqDNA聚1．7引物设计及扩增引物序列见表1。qnr通用 mark— buffer和DNA 合酶、dNTPs、Taqbuffer、loading Premier 用软件Primer 5．0设计，由上海生工公司合 er均购自大连宝生物公司，琼脂糖购自美国Invitro— qC5 gen公司。 ． 成。反应条件为：94 min，94℃40s，退火温度 1．3 40 oC40 主要仪器DNA扩增仪(德国Biometra公s。72 s，30个循环，72℃10min。qnr基 司)；电泳仪(北京六一仪器厂DYY．10C型)；分析 天平(上海民桥精密科学仪器公司FAll04型)；凝 胶成像分析系统(上海)天能科技公司。 1．4抗生素氨苄西林(石家庄制药集团)，氨苄 Premier 西彬舒巴坦、哌拉西林(华北制药集团北元公司)， 游和下游序列，使用软件Primer 5．0设计， 哌拉西彬他唑巴坦(深圳海滨制药公司)，头孢西 由上海生工公司合成。反应条件为：94℃5min，94 丁(深圳制药厂)，头孢他啶(英国葛兰素威康公 ℃45