毕赤酵母基因工程菌发酵植酸酶的条件优化研究.pdfVIP

廛题科夔 毕 赤 酵 母 基 因 工 程 菌 发 酵 植 酸 酶 的 条 件 优 化 研 究 刘林刘 明河 ( 临沂师范学院生命科学学院，山东临沂276005) 喃要】Pi ch i apa s t or i s能使外源真核基因正确翻译和翻译后加工，并能对许多蛋白质产物进行分泌，使产物易于提纯，是一种极具潜力的 酵母表达系统。以毕赤酵母基因工程茵为实验菌种，探索其在不同条件下的产植酸酶睛况，优化发酵条件，找出高密度生长及高效产酶的最 佳条件 ，从而降低生产成本。 睽键词] Pi ch i ap as t or i s ；酵母表达系统；植酸酶；发酵条件 植酸酶能将 植酸降解成肌醇或磷 酸肌醇和磷酸，是一种 优 良的食 品和饲料 添加剂，可消除单 胃动物因不能分解植酸而引起的抗 营养作 1 2辅f ‘? ” “” 用，提高机体对蛋白质及多种微量元素的利 用率，具有 良好的饲喂效 ；m 果，同时，刚氐了磷对环境的污染。植酸酶真正具有开发价值的仅限于 m0耐。 蒜精复≈ I辐 微生物经发 酵生产植酸酶。国外对 植酸酶的研究已有30多年的历史， 吲挪 蝴 滞蝴 ㈣粥 辩 蝌㈣ o 。1．．．．．。。。．．．。。．．。．．。～ 但 由于天然来源的植酸酶或者提取困难，或者分泌量太低，或者成本太 高，难 以满足生产的需要，由此构建基因工程菌，获得能高效表达植酸 图2 n蹴甘油下甲醇对产酶 的影响 图3 3)6甘油下 甲醇列 产旃的影 响 酶 的菌株 ，成为解决这一 问题的途径。 2氮源对 菌体生长及产酶的影 晌 巴斯德毕赤酵母(Pi c hi a pa st or i s ) 是一种极具潜力的酵母表达系 添加氮源 的目的是为了凋节碳氨比，满足 菌株的快速生长及产酶 统，它能使外源真核基因正确翻译和翻译后加工，并能对许多蛋 白质产 的需要。本实验是在4 ％的甘油浓度下。加入不同的氨源，使含氨量为 物进行分泌 ，使产物易于提纯：同时 ，自20世纪70年代起建立的 以 0 ．2％，同时做一个 空白对照。培 养60hr ，测OD值；72hr 测酶 活，结 巴斯德毕赤酵母作为单细胞蛋 白生产菌的高密度发酵方法 已经成熟，以 果见表1： 毕赤酵母基因工程菌为实验菌种，探索其在不同条件下的产酶隋况，就 纛l 举孵※糠柏藏埘生能置产一辨纛赡 能找出高密度生长及高效产酶的最佳条件 ，从而刚氐生产成本。 1酵母细胞培养时C源 的选择 由于一些重组蛋白对细胞有毒害作 用，通常在大容量、高密度的 酵母培养过程 中，需要在细胞扩增阶段用极高密度的抑制物来阻遏其他 表达系统，诱导前又需将之去除。而对于P ．pa st or i s