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E花环试验 Erythrocyte Rosette Test 一、实验目的 掌握淋巴细胞分离技术，熟悉免疫细胞的检查及功能 二、原理 T细胞：CD2/SRBCR/E-受体 总花环（Et)形成率： T细胞＋SRBC---4℃2h或过夜?E花环，代表总T细胞的百分率。60％－80％。 活性E（Ea)花环 T细胞＋SRBC短时间作用后涂片染色镜检?E花环，代表T细胞的一个亚群。20％－－40％。 三、试剂及器材 (一)肝素(25u/ml)，淋巴细胞分层液(聚蔗糖—泛影葡胺)，Hanks液，1％SRBC，灭活小牛血清。 (二)1ml吸管，注射器、针头、碘酒等。 四、操作 (一)1％SRBC悬液制备 取脱纤维绵羊血1—3ml，加等量Hank’s液，混匀后1500rpm离心5—8分钟，洗3次最后用Hank’s液配成1％悬液。 (二)分离淋巴细胞 在血球计数板记数淋巴细胞数，并将其配成1×107/ml浓度的淋巴细胞悬液。 (三)花环形成试验 1、取107淋巴细胞/ml悬液0.2ml，1％SRBC悬液0.2ml和小牛血清0.1毫升，在小试管中混合，置37℃孵育5分钟。 2、取出后500rpm离心5分钟，放4℃冰箱20分钟。 3、取出后轻轻摇动重新悬浮细胞，加半滴美兰液，用滴管吸细胞悬液一滴放载玻片上，加盖玻片后于高倍镜下计数。 五、结果 高倍镜下计数200个以上的淋巴细胞中TRFC的百分数。 凡能结合三个以上SRBC者为TRFC。 TRFC（%）= TRFC×100％ 未形成花环淋巴细胞数＋TRFC 六、注意事项 (一)检测的血标本要新鲜，放置时间不要超过3—4小时。 (二)试验用的SRBC要新鲜，脱纤维血4℃保存不得超过10天。 (三)绵羊红细胞与淋巴细胞的比例以16∶1—50∶1为宜。 (四)E花环计数前，应轻轻旋浮，不能用滴管用力吹打，否则会使形成的花环脱落。 七、报告要求 绘图记录并分析实验结果及意义。 * * 病原生物学实验室(免疫） 任书荣 人类T淋巴细胞表面存有绵羊红细胞(sheep red blood cells，RSBC)受体(E受体)。在一定条件下,SRBC可吸附在T淋巴细胞周围,形成以T淋巴细胞为核心周围环绕SRBC状如玫瑰环样的细胞集团。能够吸附三个以上SRBC的淋巴细胞称为T花环形成细胞(T rosette forming cell，TRFC）。E受体是T淋巴细胞独有的表面标志，因此E玫瑰花环试验可用于人外周血中T淋巴细胞的鉴定和计数。是测定机体细胞免疫功能的指标之一。临床上常做为某些疾病（淋巴系统增生性疾病，恶性肿瘤，自身免疫病等）的诊断，判定疗效，估计预后的参考指标。 * * *
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