RNAi沉默A549肺癌细胞CAR基因表达研究.pdfVIP

RNAi沉默A549肺癌细胞CAR基因表达的研究 摘 要 and 病毒腺病毒受体(coxsackieadenovirus receptor，CAR)基因表达 后，观察A549肺癌细胞的体外增殖能力、与血管内皮细胞的粘附能 力以及侵袭穿透基质的能力等方面的生物学行为的变化，初步探讨 CAR基因在A549肺癌细胞中的作用，为以后研究肺癌的发病机制， mRNA 寻找新的治疗方法打下基础。方法：针对目的基因CAR (NM 18、 对人GAPDH 因的表达，通过荧光倒置显微镜观察计数RNAi质粒表达载体的转染 效率，经实时荧光定量PCR从mRNA水平确定CAR基因表达显著 抑制后，分别利用平板克隆形成实验、与血管内皮细胞的粘附实验： 胞的体外增殖能力、与血管内皮细胞的粘附能力以及侵袭穿透基质的 1 细胞中CAR基因mRNA有较高的表达水平，可以进行CAR基因的 2000转染A549肺癌细胞的效率 质粒表达载体经脂质体Lipofectamine 可以达到60％．70％。经实时荧光定量PCR证实，针对CAR基因的 RNAi质粒表达载体转染A549肺癌细胞后，均可以显著抑制A549 18抑制最 肺癌细胞中CAR基因mRNA的表达，尤以A549．shCAR／1 A549． 个，其次是A549．shNC(阴性对照)组为41．40+2．71个， shCAR／11 118组形成的克隆数与其他两组相比差异均有统计学意义(尸O．05)， 说明RNAi对CAR基因表达的抑制可能对A549肺癌细胞的体外增 殖能力产生了抑制作用。(4)在与血管内皮细胞的粘附实验中， A549．shCAIVl 18组(实验组)的A549细胞的OD值最低，平均为 皮细胞的体外粘附能力。(5)Transwell侵袭小室实验中，侵袭穿过 A549．shCAR／1 18组穿膜细胞数明显减少(36．60=t=3．65个)。， 1 A549．shCAR／1 8组(实验组)穿膜细胞数与两个对照组相比较差异均 有统计学意义(尸O．01)，结果表明，CAR基因沉默可能抑制了A549 肺癌细胞的体外侵袭能力。结论：RNA干扰技术可以有效沉默A549 肺癌细胞的CAR基因的表达；CAR基因沉默后可以显著抑制A549 肺癌细胞的体外增殖、体外粘附和体外侵袭能力；CAR基因可能为 肺癌基因治疗的一个新靶点。 因)；A549肺癌细胞；生物学行为。 ontheRoleofCoxsackieandAdenovirus Study Receptor GeneSillencedinA549 CancerCellsRNAi Lung by RNA the Abstract：0bjective：Usinginterference(RNAi)toexplore roleofcoxsackieandadenovirus SillencedinA549 receptor(CAR)gene cancercell