RNAi技术干扰Survivin基因对喉癌Hep-2细胞作用的实验与研究.pdf

郑州人学2007年博十研究生论文 中文摘要 RNAi技术干扰Survivin基因对喉癌Hep一2 细胞作用的实验研究 博士研究生 刘善廷 导 师 娄卫华 郑州大学一附院耳鼻咽喉．头颈外科郑州450052 摘要 喉癌是耳鼻咽喉科常见恶性肿瘤，发病率高，在我国约占全身肿瘤的1—2％， 占耳鼻咽喉恶性肿瘤的11—22％。早期喉癌治疗以手术或放疗为主，中晚期喉癌 多采用以手术为主的综合治疗，尽管20世纪80年代以来，喉癌的治疗取得了较 大的进展，手术、放疗、化疗和免疫治疗的联合应用，大大提高了患者的5年生 存率和生活治疗。但手术、放疗和化疗致残率高、并发症多、毒副作用大，手术 后复发和转移仍是喉癌患者的主要致死原因，5年生存率的进一步提高似乎进入 瓶颈，难以有突破性进展。因此寻找新的有效、简便、毒副作用小的治疗方法成 为耳鼻咽喉科工作者关注的焦点，尤其是肿瘤形成早期和治疗后肿瘤负荷小的情 况下，对亚临床病灶的恰当处理，是避免恶性肿瘤复发、转移，和提高5年生存率 的关键。 对于手术或放疗后的亚临床病灶的处理，是影响恶性肿瘤预后的关键步骤， 也是人们近年来研究的热点。肿瘤生物治疗(Biotheropy)是应用现代生物技术 及其产品进行肿瘤防治的新疗法，它通过调动宿主的天然防卫机制或给予天然 (或基因工程)产生的针对性靶向性很强的物质来取得抗肿瘤的效应。随着对肿 瘤发生发展分子机制的深入研究和生物技术的发展，生物治疗已经成为肿瘤综合 治疗中的第四种模式。恶性肿瘤的生物治疗主要有：基因治疗，肿瘤疫苗治疗， 生物反应调节剂治疗等。其中基因治疗不仅能够使恶性肿瘤细胞的恶性表型逆 转，抑制肿瘤生长，而且可以使受到损伤的细胞得以修复，去除引起突变的始动 因素，是一种直接有效的治疗。这种治疗应用于临床，已经取得可喜的成果。但 ‘，‘!￡；{ 郑州大学2007年博l：研究生论文 中文摘要 传统肿瘤基因治疗的转染效率低、靶向性差、抗癌基因表达量低的缺点。 为解决以上缺点，近年来RNAi干扰技术被应用于恶性肿瘤基因治疗的试验 研究。其原理是小片段RNA(siRNA)利用碱基互补的原理，特异性地结合癌基 因的mRNA，干扰其翻译、转录形成蛋白质的功能，阻抑癌蛋白的生成。使癌 细胞向成熟方向分化或诱导细胞凋亡，从而达到抑制肿瘤细胞增殖的目的。RNAi 技术是在核酸水平改变肿瘤操控基因的治疗方法，特异性强届4作用小，有希望 成为新的基因治疗途径。 Survivin是新近发现的tAP家族成员之一，是目前发现的抗凋亡能力最强的 凋亡抑制因子，具有不同于IAP家族其他成员的独特性质和结构，在正常成人组 织中不表达而选择性地表达于恶性肿瘤组织，且与肿瘤细胞的分化增殖及浸润转 移密切相关，这种独特的表达特性及其与恶性肿瘤发生、发展的密切关系，使其 成为恶性肿瘤诊断与治疗的新靶点。 基于以下目的：1．探讨survivin基因在喉癌组织中的表达及其与喉癌发生、 细胞凋亡的影响，3．RNAi技术作用于活体喉癌细胞的效果；4．RNAi技术应用 于活体的安全性。本研究用免疫组织化学方法检测喉鳞癌标本中survivin及其它 凋亡相关基因的表达及其和喉癌l|缶床特点的关系，探讨它们在喉癌的发生、发展 中的作用。建立以survivin基因为目的基因，质粒为载体的siRNA，脂质体包埋， 转染喉癌Hep．2细胞，观察转染后细胞的生长情况、survivin的表达和细胞凋亡。 建立Hep．2细胞裸鼠模型，静脉途径给药，观察瘤体增长情况，瘤细胞内survivin 的表达和细胞凋亡。 方法 基因的表达。 2．采用细胞免疫化学法观察survivin蛋白在喉癌Hep．2细胞系中的表达情况。 3．脂质体包埋survivin 检测survivin 4．采用RT-PCR方法检测不同浓度、不同作用时问survivin 郑州大学2007年博+研究生论文