观赏南瓜未受精子房、胚珠离体培养及其机理与研究.pdfVIP

摘要 moschata 南瓜(CucurbitaD．)又名倭瓜，具有较高的观赏及药用保健价值。目前，我国观赏 类南瓜的育种理论及技术基础相对滞后，导致优良品种较少且品种更新速度慢。通过南瓜未受精胚 珠离体培养的单倍体育种途径，可以人工诱导南瓜的离体雌核发育，从而快速获得单倍体以及双单 倍体植株，进而迅速获得纯合的系统，为观赏类南瓜优良自交系的选育提供有效的技术手段。未受 精胚珠离体培养建立的再生体系也可以作为南瓜遗传工程的理想受体系统，使隐性基因得以顺利表 达。本论文以“试验南瓜I号”为材料．通过对南瓜(Cucurbitamoschata D．)未授粉子房和未受 精胚珠的离体培养，诱导了雌核发育，并获得了染色体数减半的胚囊植株。并以MS为基本培养基， 刺激等因素对未受精胚珠诱导的影响；同时，分别采用石蜡切片法和改良苯酚品红压片法观察南瓜 胚囊发育过程及根尖染色体，并利用抗微管除草剂氟乐灵和秋水仙素对南瓜进行了加倍诱导研究。 旨在为建立高效的南瓜未授粉子房和未受精胚珠的培养技术和探讨雌核发育的机理，为观赏类南瓜 单倍体培养奠定重要的理论基础和实践支撑。研究结果如下： 1．利用石蜡切片技术系统观察了南瓜的子房胚囊发育过程。发现南瓜的子房胚囊发育时期为 时期(开花前ld)、成熟胚囊期(开花当天)，其中成熟胚囊期(七细胞八核)胚囊为蓼型胚囊。 同时发现开花当天的未受精胚珠(成熟胚囊期)的胚状体诱导率、成苗率均高于开花前ld和2d 的未受精胚珠。 2．黑暗热激预处理条件下南瓜未受精离体雌核诱导效果较好，其中未受精子房培养以35℃条 件下黑暗热激处理6d为最佳，其出胚数和出胚率分别为4．8个、22％，与热激5d、7d差异极显著； 不同胚囊时期间的诱导效果无差异。黑暗热激处理5d条件下的未受精胚珠直接培养的转绿率和胚 状体诱导率最高，分别达到了80％和15％以上。 3．不同浓度的2争D对南瓜未受精子房离体诱导影响方面，较高的2^D浓度可有效地启动 南瓜未受精子房的雌核发育，抑制南瓜未受精胚珠胚状体的诱导；而低浓度(1．0、1．5 mg·L．‘)的 3．5、4．0和4．5 2,4-D能有效地诱导未受精胚珠的雌核发育。培养基中单独添加24．D mg·L．1条件下 均有效地刺激离体雌核的发育。其中2,4-D浓度为3．5 mg·L-‘时三个胚囊时期的未受精子房离体诱 4．5 导胚状体率达到最高，均在4．5％以上，其次为2，4-D rag-L1和4．0rag-L1处理；三种胚囊时期 1．0 4个、2个和1个。在2,4-D rag·L．1条件下的南瓜未受精胚珠离体培养的胚状体诱 mg·L．1和1．5 导率和转绿率较高，而低浓度或高浓度2AD条件下其诱导率均较低。 mg-L12,4-D+0．5mg·L．‘NAA+0．5rag·L．‘6-BA效果最佳；而南瓜未受精胚珠离体诱导以1．0mg·L．1 2,4-D+0．25mg·L-1NAA+I．0rag-L-16-BA处理效果最好，其子叶胚数达到6个。 1 5．蔗糖和葡萄糖均可作为南瓜未受精子房诱导雌核发育的碳源，其中蔗糖的诱导效果好于葡 萄糖。不同蔗糖浓度条件下309·L．1处理的胚状体诱导率最高，为8．52％；不同葡萄糖浓度处理下 409-L‘处理的胚状体诱导率最高，为4．44％。不同蔗糖浓度条件下南瓜未受精胚珠诱导胚状体效果 以259·L-’处理最好，其胚状体诱导率为83．33％，子叶胚达到7个。 1．0