马铃薯甲虫体液对dsRNA的降解及聚乙烯亚胺（PEI）对dsRNA的保护作用.pdfVIP

新疆农业科学 2014，51(4)：673—678 XinjiangAgriculturalSciences doi：10．6048／j．issn．1001—4330．2014．04．013 马铃薯甲虫体液对 dsRNA的降解及聚乙烯亚胺 (PEI)对 dsRNA的保护作用 李晓旭 ，付开赘 ，李国清 ，吐尔逊 ，何 江。，郭文超。 (1．石河子大学农学院，新疆石河子832003；2．南京农业大学昆虫系／农业部病虫害监测与治理重点开放实验室，南京210095； 3．新疆农业科学院植物保护研究所／农业部西北荒漠绿洲作物有害生物综合治理重点实验室，鸟鲁木齐830091) 摘 要：【目的】明确马铃薯甲虫中肠液和淋巴液对腺苷高半胱氨酸水解酶(S—adenosyl—L—homocysteine hydrolase，SAHase)dsRNA(dsSAHase)的降解，探寻dsRNA稳定剂，提高dsRNA导入效率。 【方法】马铃薯甲 虫中肠液及淋巴液与dsSAHase在不同温度条件下体外孵育，观测其作用结果；构建聚乙烯亚胺(polyethylenei— mine，PEI)PEI—dsSAHase复合物，饲喂马铃薯甲虫2龄幼虫，观测PEI对dsSAHase的增效作用。 【结果】马 铃薯甲虫中肠液与淋巴液都降解 dsSAHase，该降解作用受温度影响较小。单体 dsSAHase菌液饲喂马铃薯甲 虫2龄幼虫死亡率为55％，而PEI—dsSAHase复合物饲喂马铃薯 甲虫2龄幼虫死亡率达到75％。 【结论】 dsRNA会被马铃薯甲虫体液部分降解 ，而PEI与 dsRNA结合形成复合物，提高了dsRNA的稳定性 ，抑制了 dsRNA在虫体内的降解。 关键词：马铃薯 甲虫；中肠液和淋巴液 ；RNA干扰 ；腺苷高半胱氨酸水解酶；PEI 中图分类号：$435．32 文献标识码 ：A 文章编号：1001—4330(2014)40 —0673—06 DegradationofdsRNAinLeptinotarsadecemlineata(Say)andthe ProtectiveEfflectofPolyethyleneimineondsRNA LIXiao—XU ，FU Kai—yun ，LIGuo—qing ，Tuerxun。， HEJiang，GUO Wen—chao (1．CollegeofAgronomy，ShihezhiUniversity，ShiheziXinfiang832003，China；2．DepartmentofEntomolo— gY，CollegeofPlantProtection，NanfingAgriculturalUniversity，Na ng210095，China；3．ResearchInstitute ofPlantProtection，XinfiangAcademyofAgriculturalSciences／ yLaboratoryofIntegratedManagementof r， ￡ZCropVermin North—westernOasis，MinistryofAgricuhure，P．R．China，UrumqiXinfiang 830091，China) Abstract：【Objective】Thepurposeofthisprojectistodeterminethedegradationofmidgutfluidand haemolymphfrom Leptinotarsadecemlineata(Say)larvaetoS—adenosyl—L—homocysteinehydrolase(SA． Hase)genedsRNAandevaluatetheprotectionofpolyethyleneimine(PEI)againstthedegradation．【Meth- od]ThedegradationwasestimatedusinggelelectrophoresistoanalyzeE．colitotalnucleicacidafterincuba— tionwiththemidgutfluidorthehaemolymph．ThetoxiceffectsofdsSAHaseandPEI——dsRSAHasemixt