脲素酶测定.docVIP

中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 UDC 664.841.655 大豆制品中尿素酶活性测定方法 :543.062 Method for the determination of urease GB 8622-88 activity in soya bean products 适用范围 本标准适用于由大豆制得的产品和副产品中尿素酶活性的测定。本法可确认大豆制品的湿热处理程度。 定义 本标准所指尿素酶活性定义如下： 在30±0.5℃和pH7的条件下，每分钟每克大豆制品分解尿素所释放的氨态氮的毫克数。 原理 将粉碎的大豆制品与中性尿素缓冲溶液混合，在30℃保持30min,尿素酶催化尿素水解产生氨的反应。用过量盐酸中和所产生的氨，再用氢氧化钠标准溶液回滴。 仪器设备 4.1 样品筛：孔径200μm； 4.2 酸度计：精度0.02pH，附有磁力搅拌器和滴定装置； 4.3 恒温水浴：可控温 30±0.5℃； 4.4 试管：直径18mm,长150mm，有磨口塞子； 4.5 精密计时器； 粉碎机：粉碎时应不生强热（例如球磨机） 分析天平：感量0.1mg； 移液管：10mL。 试剂和溶液 5.1 尿素（GB 696-77）：分析纯； 5.2 磷酸氢二钠（GB 1263-77）：分析纯； 5.3 磷酸二氢钾（GB 1274-77）：分析纯； 5.4 尿素缓冲溶液（pH6.9至7.0）：4.45 g磷酸氢二钠（5.2）和3.40g磷酸二氢钾（5.3）溶于水并稀释至1000mL，再将30g尿素（5.1）溶在此缓冲溶液中，可保存1个月。 5.5 盐酸（GB 622-77）：分析纯，c(HCl)=0.1mol/L溶液； 5.6 氢氧化纳（GB 629-77）：分析纯，c（NaOH）=0.1mol/L标准溶液，按GB601标准溶液制备方法的规定配制。 试样的制备 用粉碎机（4.6）将10g试样粉碎，使之全部通过样品筛（4.1）。对特殊试样（水分或挥发物含量较高而无法粉碎的产品）应先在实验室温度下进行预干燥，再进行粉碎，当计算结果时应将干燥失重计算在内。 测定步骤 称取约0.2g已粉碎的试样，称准至0.1mg，转入试管（4.4）中（如活性很高只称0.05g 试样），移入10mL尿素缓冲溶液（5.4），立即盖好试管并剧烈摇动，马上置于30±0.5℃恒温水浴（4.3）中，准确计时保持30min。即刻移入10mL盐酸溶液（5.5），迅速冷却到20℃。将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两次，立即用氢氧化钠标准溶液（5.3）滴定至PH4.70。 另取试管作空白试验，移入10mL尿素缓冲液（5.4），10mL盐酸溶液（5.5）。称取与上述试样量相当的试样，也称准至0.1mg，迅速加入此试管中。立即盖好试管并剧烈摇动。将试管置于30±0.5℃的恒 中华人民共和国农牧渔业部1987-08-02批准 1988-08-01实施 GB 8622-88 温水浴，同样准确保持30min，冷却至20℃，将试管内容物全部转入烧杯，用5mL水冲洗试管两次，并用氢氧化钠标准溶液（5.3）滴定至PH4.70。 8 测定结果的计算 8.1 计算方法 以每分钟每克大豆制品释放氮的毫克量表示的尿素酶的活性U，按下式计算： U= 式中：c—氢氧化钠标准溶液浓度，mol/ L； V0—空白试验消耗氢氧化钠溶液体积，mL； V—测定试样消耗氢氧化钠溶液的体积，mL； M—试样质量，g。 注：若试样经粉碎前的预干燥处理时，则 U= 式中：s—预干燥时试样失重的百分率。 8.2 重复性 同一分析人员用相同方法，同时或连续两次测定结果之差不超过平均值的10%，以其算术平均值报告结果。