人胰腺癌肿瘤干细胞体外增殖能力及耐药性的研究.docVIP

人胰腺癌肿瘤干细胞体外增殖及耐药的研究 陈锦鹏 王志伟 陆玉华 陆俊杰 钱海鑫* 【摘 要】目的 研究胰腺癌肿瘤干细胞体外增殖能力及其对化疗药吉西他滨耐受性。方法 以CD44+CD24+ESA+为表面标记，用流式细胞仪，在人胰腺癌Panc-1细胞系中分选肿瘤干细胞，接种在96孔板中，用CCK8法检测其体外增殖能力，描制生长曲线，用吉西他滨分别干预普通肿瘤细胞和肿瘤干细胞，比较分析化疗药刺激对两种细胞生长的影响，并计算IC50值。结果 CD44+CD24+ESA+阳性细胞生长速度明显慢于Panc-1细胞，呈干细胞球样缓慢生长，其对吉西他滨抑制试验不如Panc-1细胞敏感。结论 .肿瘤干细胞在体外培养中表现缓慢生长及为耐受化疗药物的干细胞特性。 关键词：胰腺癌，肿瘤干细胞，吉西他滨，耐药性 【Abstract】 Objective To study the proliferation and drug -resistence ability of pancreatic cancer stem cell in vitro. Methods Isolate pancreatic cancer stem cells of CD44+CD24+ESA+ phenotypes by a FACS Aria II in human cell line Panc-1. To investigate proliferation ability of cancer stem cell, we draw a growth curve by ways of CCK8 staining. To detect the ability of drug-resistence of cancer stem cell, we stimulated both cells by gemcitabine and study the difference of their IC50.Results Panc-1 Cell and CD44+CD24+ESA+ cells were restrained by gemcitabine. In 48th hour IC50 of Panc-1 cell is 982μg/ml, IC50 of CD44+CD24+ESA+ is 1981μg/ml. In 72th hour IC50 of Panc-1 cell is 670μg/ml, IC50 of CD44+CD24+ESA+ cell is 1484μg/ml Conclusions Cancer stem cell perform a stem cell-like characteristic of declined proliferation and highly drug-resistence. Keywords Pancreatic cancer，Cancer stem cell，gemcitabine，drug-resistence [基金项目] 国家自然科学基金资助课题（江苏省自然科学基金（BK2010276） [作者单位] 陈锦鹏 南通大学附属医院 苏州大学医学院博士研究生 [通信作者] 钱海鑫 苏州大学附属第一医院 胰腺癌在癌症致死病因中排在第四至第五位，其五年生存率不足5%，中位生存期仅6个月[1]。胰腺癌最让人头疼的问题之一是他对传统治疗手段普遍耐受[,3]，很多研究发现，在接受传统放化疗之后胰腺癌开始变得耐药，使预后变差[]。 目前人们对胰腺癌的传统治疗无法改变这一现状，而基于胰腺癌手术标本和细胞系的基因表型和蛋白表达方面的研究[]也未取得令人满意的结果。研究者们在不断尝试着胰腺癌治疗的新方法，他们希望通过胰腺癌干细胞的研究，发现干细胞特有的标记物，从而特异性的杀灭肿瘤干细胞。一系列的研究将矛头指向了可能存在并发挥关键作用的胰腺癌干细胞，胰腺癌干细胞属于肿瘤干细胞(Cancer Stem Cell, CSC)，他们能自我更新和多向分化，并且还有强大的侵袭、转移和耐药的能力。Lilly France 。 1.2 实验流程与方法 1.2.1 人胰腺癌细胞的培养和胰腺癌干细胞的获得 将人胰腺癌细胞株Panc-1细胞接种于含10％胎牛血清的DMEM高糖培养基、青霉素(1×105U／L)和链霉素(100mg／L)组成的培养基中， 5％CO2，饱和湿度，恒温37℃培养，达到对数生长期后，用0.25％胰酶消化，完培重悬，离心弃去上清后，PBS液重悬细胞并计数。每1×106个细胞分别加入20μL抗人CD24-PE、抗人CD44-AP