石油污染物的微生物降解研究.docVIP

石油污染物的微生物降解研究 李春荣1，王文科1，曹玉清2 ，王丽娟1 1. 长安大学环境科学与工程学院，西安 710054；2吉林大学资源与环境学院，长春 130023以炼油厂污水池底泥中分离的3株细菌和3株真菌为供试微生物，陕北黄土（0~20 cm）制备的土壤悬浮液为土壤微生物对照，灭菌培养基为非生物降解对照，研究不同组合微生物的生长动态及对石油烃的降解率。将不同组合的微生物接种到石油烃质量浓度为10000 mg·L-1的液体培养基中，29 ℃±1 ℃，摇床连续培养50 d。于0 ~72 h内取样，进行微生物生长动态检测；于5~50 d定期取样，考察培养基中石油烃降解率的动态变化。结果表明：单独外源菌降解效果优于混合外源菌和土著微生物，25 d后土著微生物生物降解率超过混合外源菌。外源细菌、外源真菌、混合外源菌和土著微生物50 d生物降解率分别为71.54 %，60.13 %，47.26 %和51.49 %。土壤细菌对石油污染物具有较强的生长适应性，外源细菌降解效果最好。 石油污染土壤；细菌；真菌；微生物降解中图分类号：X172 文献标识码：A 文章编号：1672-2175（200）0-0113-04现代工业的飞速发展，对石油的需求量日益增加，国家在提高原油产量的同时千方百计寻求开发新的石油资源。然而，在石油的开采、运输、储藏、加工过程中，由于设备检修、意外事故或操作不慎等原因使相当量的石油进入环境，导致土地受到严重污染。据报道[1-3]，辽河油田周围有的土壤含油量超过10000 mg·kg-1，远远高于国家农业标准临界值500 mg·kg-1；延河岸边油井所在的典型污染断面石油含量高达13460 mg·kg-1 ，一般断面也高于1388 mg·kg-1；大庆、辽河等油田的重污染区的表层土壤（0~20 cm）石油含量达30~50%。石油污染土壤给人类生存带来极大的危害，受到专家学者的普遍关注，同时也激发人们不断发明、探索更为有效的技术对其进行修复。目前用于土壤石油污染治理的方法主要包括：物理修复法，化学修复法和生物修复法。前两种方法比较成熟，但费用昂贵，存在二次污染；生物修复法具有成本低、操作方便、无二次污染、不需大型设备、场地适应性强等优点而倍受关注[4~8]，近十几年来该项技术得到了较大发展。微生物修复技术是生物修复中最重要、最核心的组成部分[9-13]，因而，寻求高效石油降解菌是提高石油烃生物降解率的重要途径。本文以自主分离的6株微生物为研究对象，通过摇床培养研究了不同微生物组合下，微生物的生长曲线及其对石油烃的降解性能，为石油污染土壤的生物修复提供技术支持。 供试土壤采自洛川试验田，属粉质黏土，总有机碳1.82%，总氮质量分数0.15%，总磷质量分数0.13%，总钾质量分数2.17%，pH值为7.2；实验用石油密度为0.852~0.893 kg·L-1。主要仪器：752型紫外分光光度计，上海光谱仪器有限公司, AL204-IC电子天平，瑞士(梅特勒-托利多)公司；TOC-VCPH总有机碳测定仪，日本岛津公司。 供试外源菌为自延安炼油厂污水池底泥中驯化、富集、分离纯化得到的嗜油菌，其中，细菌3株，分别属节细菌（Arthrobacter sp.）、芽孢杆菌（Bacillus sp.）、微球菌（Micrococcus sp.）；真菌3株，分别属木霉（Trichoderma sp.）、头孢霉（Cephalosporium sp.）、曲霉（Aspergillus sp.）。 细菌计数用牛肉蛋白胨培养基，真菌计数用察氏培养基。液体培养选用基本培养基，成分如下：K2HPO4 0.40 g，Na2HPO4·12H2 0 0.6 g，MgSO4·7H2O 0.2 g，CaCL2 0.01 g，FeSO4·7H2O 0.01 g，MnSO4·H2O 0.02 g，NH4NO3 1.00 g，葡萄糖2.0 g，母膏0.5 g，蒸馏水1000 mL，pH值7.0。 将基本培养基分装于250 mL三角瓶中，每瓶装100 mL，于121 ℃，灭菌20 min，冷却后向其中各加入1000 mg石油烃,得初始质量浓度为10000 mg·L-1的含油培养基。分别用五组不同组合的微生物进行接种：3种细菌混合菌（Ⅰ），3种真菌混合菌（Ⅱ），3种细菌与3种真菌混合菌（Ⅲ），土著微生物菌悬液（Ⅳ），无菌蒸馏水（Ⅴ）。六种外源菌菌悬液活细胞数约106 ~107个·mL-1,单菌种接种量均为1 mL；Ⅳ，Ⅴ（对照）处理的接种量均为3 mL。接种后于29 ℃±1 ℃，120 r·min-1，摇床培养50 d。分别于0 h，5 h，10 h，15 h，20 h，25 h，30 h，35 h，40 h，45 h，50 h，