《生化》实验四影响酶活性的因素.pptVIP

动 物 生 物 化 学 实 验 实验四 影响酶活性的因素 一、实验目的 通过对唾液淀粉酶活性的观察，验证温度、pH、激活剂、抑制剂等对酶活性的影响。 二、实验原理 唾液淀粉酶存在于唾液中，其作用的底物是淀粉。 在不同的温度、pH、及添加激活剂和抑制剂的条件下，将唾液淀粉酶加入到淀粉溶液中，作用一定时间以后，取出反应液，加入碘指示剂，比较各种条件下，反应液与碘反应后颜色的差异，由此说明淀粉酶活力的变化。 三、实验试剂及器材 1.试剂 1%淀粉溶液：1g淀粉和0.3g NaCl，用5ml蒸馏水悬浮，慢慢倒入60ml煮沸的蒸馏水中，煮沸1min，冷却至室温，加水到100ml，冰箱贮存。 碘液：3g KI溶于5ml蒸馏水中，加1g I2，溶解后再加295ml水，混匀贮存于棕色瓶中。 pH4.0、pH6.8、pH8.0磷酸盐缓冲液 1% CuSO4溶液 1% NaCl 2. 器材 恒温水浴锅 电炉 白瓷板 四、实验操作 1. 唾液淀粉酶的制备 取干净的水杯，盛上蒸馏水。 用蒸馏水漱口。 口含约20ml蒸馏水，1-2分钟后，吐入一干净烧杯中，棉花过滤。 2. 温度对唾液淀粉酶活力的影响 3.pH对唾液淀粉酶活性的影响 4.激活剂和抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响 五、实验结果 1. 根据实验结果，说明各种因素对唾液淀粉酶活性的影响情况。 2. 结合课堂讲授理论，解释之。 * * 淀粉 I2：蓝色 淀粉酶 糊精（大分子，小分子） 紫红色、暗褐色或红色 淀粉酶 麦芽糖+少量葡萄糖 棕黄色，碘本身颜色 淀粉水解过程中与碘反应，其颜色的变化，可以指示淀粉的水解程度，也可以由此判断淀粉酶活力强弱。 取3支试管，按下表操作： 各管在相应温度中水浴，每隔1分钟从第2号管吸取1滴反应液于白瓷板上，用碘液检查反应进行情况，直至反应液不再变色（只有碘液的颜色），立即取出所有试管，流水冷却2min，各加1滴碘液，混匀。观察并记录各管反应现象，解释之。 0 37 沸水 温度处理（℃） 1 1 1 唾液淀粉酶溶液(ml) 0.5 0.5 0.5 pH6.8磷酸缓冲液(ml) 1 1 1 1%淀粉溶液(ml) 管号 1 2 3 操作项目 1 1 1 唾液淀粉酶溶液(ml) 1 1 1 1%淀粉溶液(ml) 0 0 2 pH8.0磷酸缓冲液(ml) 0 2 0 pH6.8磷酸缓冲液(ml) 2 0 0 pH4.0磷酸缓冲液(ml) 管号 1 2 3 操作 摇匀，置37℃水浴中反应，每隔1分钟从第2号管中取出1滴反应液于白瓷板上，加碘液检查反应进行情况，直至反应液不再变色，即可停止反应，取出所有试管。向其中滴加碘液1滴，比较各管中淀粉水解程度。 取试管3支，按下表操作 1 1 1 1%淀粉溶液(ml) 1 1