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第五章 糖分析 多糖提取及分析一般流程 糖苷水解酶类型 糖苷键 底物名称 水解产物 ?-半乳糖苷酶 ?(1→4) 半乳糖 D-半乳糖，D-葡萄糖 ?-葡萄糖苷酶 ? (1→4) 麦芽糖 D-葡萄糖，D-葡萄糖 ?-果糖呋喃糖苷酶 ?(1→2) 果糖 D-葡萄糖，D-果糖 ?-半乳糖苷酶 ? (1→6) 蜜里二糖 D-半乳糖，D-葡萄糖 淀粉葡萄糖苷酶 ? (1→4) 糖原 D-葡萄糖 ? (1→6) 纤维素酶 ?(1→4) 纤维素 D-葡萄糖 一些常用的糖水解酶及其裂解反应特征 对于单糖的定量分析，如果化学分析法达不到分析特异性的要求，则要采用酶分析法。酶法通常可以在各种异构体的混合物中实现对某一种的选择性测定，并能区分?与?。只对某一种糖特异的酶很少见。一般情况下被分析样品中，可能存在几种单糖，所使用的酶与不同单糖作用的程度可能不同。 例：己糖激酶被用作葡萄糖的分析，但该酶的作用并不是专一的，它也催化其它己糖的磷酸化反应。酶的专一性也会因其来源的不同而不同。另外，酶试剂的纯化及制备方法也会影响到催化反应的特性、从而对分析结果产生影响，因而在实际应用中必须注意。 7.3.1 基于葡萄糖氧化酶的葡萄糖分析 葡萄糖氧化酶可以催化空气中的氧分子氧化?-D-葡萄糖产生D-葡糖酸内酯， ?-D-葡糖酸内酯进一步转化为D-葡糖酸，并产生过氧化氢。 葡萄糖氧化酶对其它单糖的催化反应速率为零或可以忽略。实际中通过测定所产生的过氧化氢或消耗的氧实现对?-D-葡萄糖的定量分析。 ?-D-葡萄糖 ＋O2＋H2O→D-葡萄糖酸＋H2O2 商品化葡萄糖分析仪的分析速度很快．一般在一分钟之内就可以完成，而且试剂及样品的消耗少(10?l)。一般来说葡萄糖分析仪操作简单，而且所利用的反应也很普通、常见。 7.3.2其它己糖分析方法 另外两种很常见的己糖是果糖和甘露糖，它们经常是多糖或其它生物大分子化合物的组分之一。它们也可以利用酶法进行测定，其原理如下： 利用己糖激酶分析甘露糖、果糖及葡萄糖的原理 各种糖分析方法的比较 分析方法 最小样品量 可获得的结构信息 水解-还原-乙酰化-GC 0.5mg 糖残基的组成及其相对比例 高碘酸氧化及Smith降解 1 mg 糖苷键连接位点 甲基化分析及甲基化还 0.5 mg 糖残基组成及其相对比例，糖苷键连接位点 原裂解分析 乙酰解 1-10 mg 糖苷键连接位点，糖分支情况及降解的寡糖 专一性酶分析 500 mg 糖苷键连接位点、构型及序列 NMR技术 0.05 mg 糖残基组成及其相对比例，糖苷键连接位点、 构型、寡糖的序列，取代基种类及取代位置、 寡糖完整的一级结构和溶液构型 FAB-MS及其他MS技术 ?g 分子量、序列、糖苷键连接位点、取代基种 类及取代位置 计算机技术 计算和预测寡糖的优势构型 7.4 糖混合物的分离鉴定 现代色谱技术(包括纸色谱及薄层色谱技术)对于糖的常规分离及半定量分析很有用，对更复杂的样品，高效液相色谱及高效毛细管电泳法更有用。 7.4.1 纸色谱及薄层色谱法