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《生物化学技术原理与应用》试题 （10级研究生） 请回答下列问题，每题10分，共50分。 何谓正相层析和反相层析？比较疏水层析与反相层析的异同？ 试比较SDS和其他蛋白质相对分子质量测定方法的优缺点。 什么是实验的准确度和误差、精确度和偏差？二者有何差异？如何提高实验的准确度和精密度？ 从以下几个方面比较糖的几种定量测定方法（3、5-二硝基水杨酸法、恩酮-硫酸法、苯酚-硫酸法、砷钼比色法）。 （1）实验原理 （2）适用范围 （3）优缺点 （4）实验过程中的注意事项 就你对该课程的学习和了解，谈谈你的体会和建议。 1、何谓正相层析和反相层析？比较疏水层析与反相层析的异同？ 答： 正相层析：固定相的极性大于流动相的一种液相层析类型。流动相极性越低，被分离的化合物在层析系统中的保留时间越长； 反相层析：流动相的极性大于固定相的层析技术。分子在此系统中的移动速度依其极性排列，极性大者移动快。 一致的，即：视有效成分和固定相之间相互作用的疏水力差异性大小，将有效成分分离出来。 异同点： 疏水层析（所用基质的性能与反相层析不同）：与基质结合的配体密度小，疏水性弱，对蛋白质及其复合物仅产生温和的吸附作用，吸附物容易被解析下来。故较适合分离纯化盐析后或高盐洗脱下来的物质。这不仅使有效成分的纯度得到提高，而且还保持了其原来的结构和生物活性。 反相层析：与基质结合的配体密度大，疏水性强，对蛋白质类物质具有较大的吸附力；欲将吸附物解析下来，须用含有有机溶剂的流动相（降低极性）洗脱，方可见效。洗脱液的极性降低，常常会引起大分子活性物质变性，因此反相层析一般较适合分离纯化小分子质量的肽类和辅基等物质。 2、试比较SDS和其他蛋白质相对分子质量测定方法的优缺点。 答： 优点：1.检测灵敏度高，精度高。最低蛋白质检测量可达1mg。2.测定简便、快速，所用试剂种类少。3.干扰物质少，重现性好。 缺点：1.对于不同范围的蛋白质分子量的测定需要配置不同浓度的SDS凝胶。使用时应根据待测蛋白的分子量范围选用合适浓度的凝胶，以获得更好的效果。2.如果蛋白质-SDS复合物不能达到1.4gSDS/1g蛋白质的比率并具有相同的构象，该方法就不能得到准确的结果。3.有些蛋白质是有不同亚基组成的（如血红蛋白），它们在SDS和巯基乙醇的作用下，解离成亚基而独立存在。4.由于SDS的加入会使得待测蛋白质变性，故分离所得蛋白质往往失去其原有构象。 3、什么是实验的准确度和误差、精确度和偏差？二者有何差异？如何提高实验的准确度和精密度？ 答： 准确度表示实验分析测定值与真实值相接近的程度。因测定值与真实值之间的差值为误差，所以误差愈小，测定值愈准确，即准确度愈高，误差可用绝对误差和相对误差来表示。 精确度表示在相同条件下，进行多次实验的测定值相近的程度。一般用偏差来衡量分析结果的精确度。 准确度和精确度、误差和偏差具有不同的含义，不能混为一谈，准确度是表示测定值与真实值相符合程度，用误差来衡量，误差越小，测定准确度愈高。精确度则表示在相同条件下多次重复测定值相符合程度，用偏差来衡量，偏差愈小，测定的精确度愈好。误差以真实值为标准，而偏差以平均值为标准，由于物质的真实值一般是无法知道的，我们平时所说的真实值其实只是采用各种方法进行多次平行分析所得到相对正确的平均值。用这一平均值代替真实值来计算误差，得到的结果仍然只是偏差。还应指出，用精确度来评价分析的结果是有一定的局限性的。分析结果的精确度很高，并不一定说明实验的准确度也很高。因为如果分析过程 存在系统误差，可能并不影响每次测得数值之间的重合程度，即不影响精确度，但此分析结果却必然偏离真实值，也就是分析的准确度并不一定很高。当然，如果精确度也不高，则无准确度可言。 在实际分析中，首先要求良好的精确度，测定的精确度越好，得到准确结果的可能性就越大，通常进行分析时，对同一试样，必须用同样方法，在同一条件下，由同一个人操作，做几个平行测定，取其平均值，测定次数越多，平均值就越接近真实值。 4、从以下几个方面比较糖的几种定量测定方法（3、5-二硝基水杨酸法、恩酮-硫酸法、苯酚-硫酸法、砷钼比色法）。 （1）实验原理 （2）适用范围 （3）优缺点 （4）实验过程中的注意事项 答： 3、5-二硝基水杨酸法 恩酮-硫酸法 苯酚-硫酸法 砷钼比色法 实验原理 3， 5-二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液的颜色强度呈比例关系，在540nm波长下测光密度值，还原糖的含量利用比色法可测知样品的含糖量 强酸可使糖类脱水生成糠醛，糠醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，其颜色的深浅与糖含量成正比关系，在620nm波长下可测定其光密度值，还原糖的含量利用比色法可测知样品的