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《烟草及烟草制品 挥发性有机酸的测定 气相色谱-质谱联用法》 标准项目技术报告 项目组 2013年11月 目 录 1、概述 2 2、实验 3 3、结果与讨论 6 3.1不同色谱柱系统适应性研究 6 3.2内标物质的选择 7 3.3不同萃取溶剂的比较 7 3.4不同萃取时间的比较 8 3.5不同萃取方式的比较 10 3.6不同萃取溶剂使用比例的比较 11 3.7工作曲线与检测限、定量限 11 3.8重复性和回收率 12 3.9混酸储备液及有机酸储备液有效期 14 3.10色谱柱使用寿命 17 3.11项目方法与以往文献报道方法的比较 19 3.12不同实验室之间实验结果比较 23 《烟草及烟草制品 挥发性有机酸的测定 气相色谱-质谱联用法》 技术报告 1 概述 烟草中有机酸是对烟叶和卷烟的质量有重要影响与作用的一类物质。它们种类繁多、含量差异大，因此烟草有机酸的分析研究很有意义，长期以来一直受到烟草工作者的重视[1-4]。有机酸按其挥发性分为：挥发性、半挥发性和非挥发有机酸，其中挥发性有机酸含量很低，最多只有0.1-0.2%，有的只有0.01-0.05%，但挥发性有机酸对烟叶感官质量的影响却远远大于多元酸和高级脂肪酸[5]。常温下，C10以下的低级脂肪酸和部分芳香族酸是液体，也就是平常所说的挥发性酸，这些酸在卷烟抽吸过程中直接进入烟气，故对香味有有明显影响，主要包括甲酸、乙酸，丙酸，丁酸，异丁酸，异戊酸，戊酸，3-甲基戊酸，异己酸，己酸，庚酸，辛酸，壬酸。例如：3-甲基戊酸，异戊酸的在烟叶中的相对含量较高；而且C5，C6脂肪族酸中异/正构体的比率较高，这对卷烟感官质量有重要贡献。一般质量好，香气量大的烟叶，其挥发酸含量也比较高。因此，挥发酸的较高含量是优质烟叶的化学特征。 对于烟草中挥发酸已有相关的研究报道，对于烟草中含量较高的甲酸、乙酸、丙酸、丁酸等低分子量脂肪酸，由于它们水溶性强、挥发性强，采用一般的气相色谱方法很难把它们与高级脂肪酸同时进行有效地分离和准确的定量分析，大多数是各实验室自己开发的方法，烟草行业没有自己统一的测定方法[6-11]。因此建立烟草及烟草制品中挥发性有机酸测定的行业标准，可以规范烟草挥发酸的测定方法，进一步全面了解挥发酸对卷烟品质的影响，有利于对烟叶原料和中式卷烟质量稳定的控制和监督，同时对提升中式卷烟产品竞争力将有十分重要的意义，对卷烟配方设计亦具有较高的理论和实用价值，因此建立烟草及烟草制品中烟草中挥发酸标准测定方法的研究是十分必要的。 本项目利用振荡溶剂萃取对烟草和烟草制品中挥发性有机酸进行提取，使用气相色谱/质谱联用-选择离子监测法进行测定，采用内标法进行定量分析。 2 实验 2.1 仪器与试剂 甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、二氯甲烷，乙腈、丙酮、乙醚均为色谱纯试剂，甲酸、乙酸，丙酸，丁酸，异丁酸，异戊酸，戊酸，3-甲基戊酸， 4-甲基戊酸、己酸，庚酸，辛酸，壬酸，癸酸等十四种标准挥发酸物质和丙酸苯乙酯均为分析纯试剂，纯度≥98%。 分析天平：感量0.1 mg天平，振荡器，弹性毛细管柱DB-5MS、DB-INNOWAX、 DB-FFAP 柱，规格为30m×0.25mm×0.25μm。 2.2 溶液配制 2.2.1 内标萃取溶液 2.2.1.1 内标萃取储备液 准确称取约0.18 g丙酸苯乙酯置于100 mL的容量瓶中，精确至0.0001 g，加入丙酮定容至刻度。该储备液在-20℃冰箱内存放，有效期为3个月。 2.2.1.2 内标萃取溶液的配制 准确移取内标萃取储备液5.0 mL加入500 mL容量瓶中，加入丙酮(4.1)定容至刻度。该内标萃取溶液应在使用前配制。 2.2.2 有机酸标准溶液 2.2.2.1 混酸（除甲酸、乙酸外其余各酸混合液）储备液的配制 2.2.2.1. 1 混酸一级储备液 按表1准确称取有机酸丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸、3-甲基戊酸、4-甲基戊酸、己酸、庚酸、辛酸、壬酸、癸酸，置于100 mL容量瓶中，精确至0.0001 g，加入内标萃取溶液定容至刻度，为混酸一级储备液。该储备液在-20℃冰箱内存放，有效期为3个月。 2.2.2.1.2 混酸二级储备液 准确移取混酸一级储备液 1.0 mL置于50mL容量瓶中，加入内标萃取溶液定容至刻度，为混酸二级储备液。该储备液在-20℃冰箱内存放，有效期为3个月。 2.2.2.1.3 有机酸储备液 分别准确称取甲酸和乙酸各0.07 g，精确至0.0001 g，移取混酸二级储备液1.0 mL置于50mL容量瓶中，用内标萃取溶液定容至刻度。该储备液在-20℃冰箱内存放，有效期为3个月。 表1 混酸储备液中各混酸的称取质量 序号 有机酸 质量（g） 1 丙酸 1.6 2 丁酸 0.2 3