双向电泳所需试剂.docVIP

用户需要准备事项 确定电源接地 单蒸水 操作环境：15–30 °C ±2 °C 操作环境湿度要求：相对湿度0–70%* 大量筒或烧杯 ( 1L, 500ml,250ml,50ml) 去离子水或MilliqQ水 提前购买染胶的盒子（30×20cm，最好有盖子） 如需实验：准备样品和如下试剂。 附录 I 溶液 注意请按照实验所需量酌量或减量配制 A. 双向电泳的样品裂解溶液(含有尿素) （8 M尿素，4% CHAPS，2%两性载体Pharmalyte或IPG缓冲液(载体两性电解质)，40 mM DTT, 25 ml） 最终浓度 用量 尿素(FW 60.06) 8 M 12 g CHAPS 4% (w/v) 1.0 g 两性载体Pharmalyte 或IPG缓冲液(现用现加) 2% (v/v) 500 μl DTT (FW 154.2) 40 mM 154 mg 双蒸水 — 至25 ml (需要水约16ml) 分装为 1.0 ml溶液储存于-20℃条件下。IPG buffer和DTT现用现加。酌情增减使用量,每个样品使用约1ml. (本次培训需要5ml) B. 尿素水化储备溶液 （8 M尿素，2% CHAPS，0.5/2%两性载体Pharmalyte或IPG缓冲液，0.002%溴酚蓝, 25 ml）* 最终浓度 用量 尿素(FW 60.06) 8M 12g CHAPS 2%(w/v) 0.5g 两性载体Pharmalyte或 IPG缓冲液(与IPG胶条的范围相同)(现用现加) 0.5%(v/v) 125μl 1%溴酚蓝储备溶液 0.002% 50μl 双蒸水 — 至25ml(需要水约16ml) 分装为1.0ml溶液储存于-20 ℃条件下。每个样品使用约1ml. (本次培训需要5ml) 使用前加入DTT和IPG buffer，每1.0ml水化储备溶液中加入2.8mgDTT。 载体两性电解质或IPG缓冲液现用现加。 C. SDS平衡缓冲液 (6 M尿素，75 mM Tris-HCl pH8.8,29.3%甘油, 2%SDS,0.002%溴酚蓝,200ml)* 最终浓度 用量 尿素(FW 60.06) 6 M 72.1 g Tris-HCl, pH 8.8 (参见溶液F部分) 75 mM 10.0 ml 甘油(87% w/w) 29.3% (v/v) 69 ml (84.2 g) SDS (FW 288.38) 2% (w/v) 4.0 g 1%溴酚蓝储备溶液 0.002% (w/v) 400 μl 双蒸水 — 至200 ml 这是储备溶液。在使用之前，按照一定量加入1%DTT（100mg/10ml）或2.5%碘乙酰胺（250mg/10ml），分别用于第一次和第二次平衡。Max用量 10ml/胶条。 分装为20或50ml溶液储存于-20℃条件下。 （本次培训需要100ml） D. 10× Laemmli SDS电泳缓冲液 (250 mM Tris碱，1.92M甘氨酸，1% SDS，10L)* 最终浓度 用量 Tris碱(FW 121.1) 250 mM 303 g 甘氨酸(FW 75.07) 1.92 M 1441 g SDS (FW 288.38) 1% (w/v) 100 g 双蒸水 — 至10L * 不要调节该pH值。 室温条件下储存。根据不同型号二向电泳槽，根据电泳槽规格每次实验用量1× Laemmli SDS电泳缓冲液 1-10L。 （本次培训配制1L，用量分别为Tris 30.3g, 甘氨酸144.1g, SDS 10g,溶解在1L水里） E. 30% T, 2.6% C单体储液 (30%丙烯酰胺，0.8% N, N’-甲叉双丙烯酰胺，500ml) 最终浓度 用量 丙烯酰胺(FW 71.08) 30% 150 g N,N’-甲叉双丙烯酰胺(FW 154.17) 0.8% 4 g 双蒸水 — 至500mL 用0.45μm滤膜过滤溶液，4℃避光储存。 F. 4×分离胶缓冲液 (1.5M Tris碱，pH8.8，500mL) 最终浓度 用量 Tris碱(FW 121.1) 1.5 M 90.8g 双蒸水 — 375 ml HCl — 调至pH8.8 双蒸水 — 至500mL 用0.45μm滤膜过滤溶液，4℃存储。 G．溴酚蓝储备溶液 最终浓度 用量 溴酚蓝 1% 100 mg Tris-碱 50 mM 60 mg 双蒸水 — 至10 mL H. 10% SDS溶液 (10%