亚硝酸盐的研究.docVIP

实验仪器与材料 1.1仪器 分光光度计、电子天平、比色皿、移液管、烧杯、试管、棕色容量瓶、三角瓶 1.2 原料 维生素C、牛血清蛋白、葡萄糖、儿茶酚 1.3 试剂 亚硝酸钠、对氨基苯磺酸、盐酸萘乙二胺均为分析纯，蒸馏水。 0.4%的对氨基苯磺酸：准确称取0.4g对氨基苯磺酸溶于100ml20%盐酸中，混匀、避光保存。 0.2%的盐酸萘乙二胺：准确称取0.2g盐酸萘乙二胺溶于100ml蒸馏水中，混匀、避光保存。 200 μg /mL亚硝酸钠储备液：准确称取0.4928g干燥的亚硝酸钠，加蒸馏水溶解，定容至100ml。 5μg/ml的亚硝酸钠标准液：吸取储备液亚硝酸钠5.00ml，蒸馏水定容至100ml。 修改后： 200μg/ml的亚硝酸钠储备液：准确称取0.0500g干燥的亚硝酸钠，加蒸馏水水溶解移入250 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。 5μg/ml的亚硝酸钠标准液：吸取储备液亚硝酸钠5.00ml，蒸馏水定容至00ml O.5mol/L柠檬酸—柠檬酸钠缓冲溶液（pH=3.0）：0.1mol/L柠檬酸18.6ml（21.01gm/l），0.1mol/L柠檬酸钠1.4ml（29.41g/ml）加蒸馏水定容至100ml。 0.1mol/l盐酸：量取5ml盐酸（35%-37%），用水稀释至600ml。 0.1mol/l碳酸钠：称取5.2995g的碳酸钠，置于500ml的容量瓶中，加水稀释至刻度。 试验方法 2.1最大吸收波长的确定 准确吸取5μg/ml硝酸钠标准液0.5ml置于25ml容量瓶中，加入0.4 %对氨基苯磺酸1.0 mL，摇匀静置4 min，加入0.5 mL 0.2 %盐酸萘乙二胺，加水定容至刻度,摇匀。静置15min，另以蒸馏水代替亚硝酸钠，用同样配制方法的溶液作为空白（即参比溶液），做光谱扫描, 测定最大吸收波长。 2.2、标准曲线的绘制 分别吸取0.00ml、 1.00ml、2.00ml、3.00ml、4.00ml、5.00mL、6.00ml、7.00ml亚硝酸钠标准使用液分别置于25ml容量瓶中，加入4g/L对氨基苯磺酸1.0mL，摇匀,静置4 min，加入0.5mL2g/L盐酸萘乙二胺，加蒸馏水定容至刻度,摇匀，静置15min于最大波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线，另以蒸馏水代替亚硝酸钠，用同样配制方法的溶液作为空白（即参比溶液）。（R=0.999） 2.3、样品对亚硝酸盐的清除率 2.3.1、单因素试验 2.3.1.1、提取液配比对亚硝酸盐清除率的影响 分别准确称取6份维生素C、葡萄糖、儿茶酚、牛血清蛋白5g分别于6个三角瓶中，分别加入5ml、10ml、15ml、20ml、25ml、30ml蒸馏水于室温下反应30min。 准确吸取5μg/ml亚硝酸钠6份各7ml分别置于25ml的容量瓶中，各取上述反应液5ml加入其中反应5min后，容量瓶中分别加入4g/L的对氨基苯磺酸溶液1.0mL,摇匀,反应5min，再加入2g/L的盐酸萘乙二胺0.5mL，摇匀，静置15min后，在最大吸收波长540nm处测定吸光度，分别为,、，试验重复3次，计算样液对亚硝酸盐的清除率公式如下： R= 式中：R——清除率(%); ——未加样液亚硝酸钠的吸光度； ——加提取液后亚硝酸钠的吸光度。 表1反应液配比对亚硝酸盐的清除率表 配比（加水量ml） A1(n=3) A2(n=3) 清除率（%） 5 10 15 20 25 30 2.3.1.2、反应时间对亚硝酸盐清除率的影响 分别准确称取6份维生素C、葡萄糖、儿茶酚、牛血清蛋白5g分别于6个三角瓶中，分别于室温下反应一定时间（0min、30min、60min、90min、120min、150min）。 准确吸取5μg/ml亚硝酸钠6份各7ml分别置于25ml的容量瓶中，各取上反应液5ml加入其中反应5min后，容量瓶中分别加入4g/L的对氨基苯磺酸溶液1.0mL，摇匀，反应5min，再加入2g/L的盐酸萘乙二胺0.5mL，摇匀，静置15min后，在最大吸收波长540nm处测定吸光度，计算清除率 表2不同反应时间对亚硝酸盐的清除率 时间（min） A1(n=3) A2(n=3) 清除率（%） 0 30 60 90 120 150 2.3.1.3反应温度温度对亚硝酸盐清除率的影响 分别准确称取6份维生素C、葡萄糖、儿茶酚、牛血清蛋白5g分别于6个三角瓶中，分别于（20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃）温度下提取30min。 准确吸取5μg/ml亚硝酸钠6份各7ml分别置于25ml的容量瓶中，各取上述反应液5ml加入其中反应5min后，容量瓶中分别加入4g/L的对氨基苯