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本 科 毕 业 论 文 题 目：聚蛋白多糖基因多态性与骨性关节炎相关性研究 姓 名： 学 号： 0625400059 院 系： 检验医学院 年 级： 2006级 专 业： 医学检验 ? 指导教师： 孙鹥主治医师 实习单位： 云南省第一人民医院 二○一二 年 五 月 目录 聚蛋白多糖基因多态性与骨性关节炎相关性研究 摘要 目的：方法：关键词 骨性关节炎；聚蛋白多糖基因；多态性 Correlation Study between Aggrecan Gene Polymorphism and Osteoarthritis Abstract Objective: To explore the association between osteoarthritis and aggrecan gene polymorphism. Methods: The study group consisted of 80 patients with single knee osteoarthritis and 30 healthy controls. Genomic DNA can be obtained from blood of all people and then aggrecan gene can be amplified by PCR. The PCR products can be analyzed by agarose gel electrophoresis. Results: The significant repeat number in osteoarthritis are 26,27 and 28, while healthy control are 28 and 29. Conclulsion: Compared with healthy control, the frequency of repeat number 26,27 and 28 are high. However, based on the currently available data there are unclear correlation between aggrecan gene polymorphism and osteoarthritis. So further study should be needed. Key words osteoarthritis; aggrecan gene; polymorphism 前言 选自2010年1月到2011年2月云南省第一人民医院骨科，因膝关节关节炎出现关节肿胀行MRI检查的患者80例，其中男性37例，女性43例，25到57岁，平均37.6岁。诊断符合中华医学会骨科学分会2007年颁布的骨关节炎诊断指南中OA的诊断标准。同时设30例健康对照组。 1.2 排除对象 ①有炎症、创伤及手术史，肿瘤、糖尿病等疾病的患者;②诊断或者疑似为风湿、类风湿性关节炎等自身免疫性疾病的患者;③检查前两周内使用过糖皮质类固醇激素、非甾体消炎止痛药的患者;④妊娠、哺乳期间的妇女;⑤有感染性关节炎、其他反应性关节炎等关节疾病的患者;⑥重度OA，需行关节置换的患者;⑦年龄超过57 岁。 1.3 主要试剂和仪器 提取DNA的试剂为购自百泰克生物的全血基因组DNA快速提取试剂盒（批号，PCR试剂、琼脂糖凝胶电泳的Marker购自宝生物工程（大连）有限公司，DNA扩增设备为SLAN荧光定量PCR仪，PCR引物委托上海生工合成。 1.4 方法 1.4.1 DNA提取 空腹抽取静脉血2ml于EDTA抗凝管中，颠倒混匀，用百泰克生物全血基因组DNA快速提取试剂盒提取外周血DNA，具体方法为：①取200μl血液放入1.5ml离心管。②加入200μl结合液CB，轻摇混匀，再加入20μl蛋白酶K溶液，轻摇混匀后70℃放置10分钟。③加入100μl异丙醇轻摇混匀，此时可能会出现絮状沉淀。④将上一步所得溶液加入一个吸附柱AC中。⑤加入500μl去除液IR，1