应用多重PCR技术检测慢性淋巴细胞白血病IgVH基因突变_医学论文.docVIP

应用多重PCR技术检测慢性淋巴细胞白血病IgVH基因突变_医学论文 应用多重PCR技术检测慢性淋巴细胞白血病IgVH基因突变_医学论文 作者：郑文娟　陈丽娟　吴雨洁　李丽　 徐卫 李建勇 【摘要】 　　免疫球蛋白重链可变区(IgVH)基因突变是慢性淋巴细胞白血病(CLL)最重要的独立预后因素之一，为探讨CLL患者IgVH基因突变状态，应用多重PCR技术检测9例CLL患者的IgVH基因，纯化PCR扩增产物后直接测序，应用IMGT/V-QUEST工具分析，明确有无IgVH突变及突变位置。结果表明： 9例CLL患者皆扩增出395-465 bp区域(MIX I)或290-360 bp区域(MIX II)单克隆条带，测序结果显示5例患者有突变，IgVH基因分别为IGHV3-11*03、IGHV3-9*01、IGHV3-23*01、IGHV4-59*01和IGHV4-34*02；4例无突变，IgVH基因为IGHV3-53*01、IGHV3-23*03、 IGHV3-33*05和IGHV3-7*01。结论： PCR检测IgVH基因突变，简化了繁琐的实验过程，缩短了实验时间，解决传统PCR对IgVH基因突变检测的桎梏，值得在临床和科研中推广使用。 【关键词】 多重PCR； IgVH； 基因突变 　　Detection of IgVH Mutation Status in Patients with Chronic Lymphocytic Leukemia by Multiplex PCR 　　Abstract IgVH mutation status is one of the most important independent prognostic factor of chronic lymphocytic leukemia (CLL). In order to evaluate IgVH mutation status in patients with CLL, IgVH mutation was detected by multiplex PCR in 9 CLL patients and purified PCR amplification products were directly sequenced, IgH somatic hypermutation and mutation site were analysed by IMGT/V-QUEST. The results showed that 5 patients had mutated IgVH, and IgVHs were IGHV3-11*03, IGHV3-9*01, IGHV3-23*01, IGHV4-59*01, IGHV4-34*02, respectively whereas 4 others had unmutated IgVH, these IgVHs were IGHV3-53*01, IGHV3-23*03, IGHV3-33*05 and IGHV3-7*01. It is concluded that multiplex PCR is a rapid and easy method to detect IgVH mutation status, and it solves the limitations and pitfalls of routine PCR, and it is worth being extensively used both in clinic and scientific researches. 　　Key wordsMultiplex PCR IgVH gene mutation 　　慢性淋巴细胞白血病(CLL)是西方国家最常见的一种恶性淋巴细胞增殖性疾病，约占全部成人白血病的30%，主要发生在老年人，男女比例为1.3-2.0∶1。我国发病率虽然低于西方国家，但随着人口的老龄化，发病率呈现逐年上升趋势。CLL患者的临床病程和转归呈高度异质性，部分患者生存同年龄、性别匹配的正常人相同，而部分患者即使接受了早期的积极治疗仍很快死亡［1,2］。因此，CLL预后因素的检测就显得尤为重要。近来多个研究组［3-6］证实，免疫球蛋白重链可变区(IgVH)基因突变是最重要的独立预后因素之一。本研究旨在应用多重RT-PCR技术研究CLL患者IgVH基因突变。 　　材料和方法 　　研究对象 　　随机选取我院血液科住院或门诊的CLL患者，共9例，其中男7例，女2例，中位年龄55 (36-77) 岁。临床分期应用Binet分期，Binet A期2例、Binet B期5例、Binet C期2例。所有患者进行外周血常规、骨髓细胞形态学和多参数