桃核承气汤对蓄血证大鼠血管MMP2,TIMP2基因表达的影响_医学论文.docVIP

桃核承气汤对蓄血证大鼠血管MMP2,TIMP2基因表达的影响_医学论文 桃核承气汤对蓄血证大鼠血管MMP2,TIMP2基因表达的影响_医学论文 【摘要】 ［目的］观察桃核承气汤对蓄血证大鼠血管基质金属蛋白酶2(Matrix Metalloproteinase2，MMP2)及金属蛋白酶2组织抑制剂( Tissue Inhibitor of Metalloproteinase2，TIMP2)基因表达的影响，探讨此方的作用机制。［方法］半定量RT－PCR检测各组大鼠颈总动脉匀浆中MMP2、TIMP2基因的表达，进行分析。［结果］与模型组相比,药物组减少了MMP2基因的表达，增加了TIMP2的表达(0.01)。［结论］桃核承气汤能改变蓄血证大鼠动脉壁MMP2、TIMP2基因的表达，这可能是其主要作用机制之一。 【关键词】 桃核承气汤；蓄血证；基质金属蛋白酶2；金属蛋白酶2组织抑制剂 　　Abstract： ［Objective］To investigate the effects of Taohechengqitang(THCQT) on the gene expression of Matrix Metalloproteinase2(MMP2) and Tissue Inhibitor of Metalloproteinase2(TIMP2)in artery vessel of Xuxuezheng rats.［Methods］Half quantitative reverse transcription polymerase chain reaction(RTPCR) was used to detect MMP2 and TIMP2 gene expression in artery vessel.They were analyzed.［Results］While compared with model group，MMP2 gene expression levels in the THCQT group were lower,and TIMP2 was higher (0.01).［Conclusion］THCQT can change the gene expression of MMP2 and TIMP2 in artery vessels of Xuxuezheng rats,which may account for the effects. 　　Key words: TaohechengqitangXuxuezhengMMP2TIMP2 　　桃核承气汤是《伤寒论》中治疗蓄血证的主方之一，具有活血祛瘀、泻热攻下的功效，在临床上，已经证实可以有效地治疗各科疾病；而既往实验研究也已表明其有改善微循环［1］，抗肿瘤［2］等作用。但蓄血证及桃核承气汤与MMP2、TIMP2是否具有相关性，缺乏报道。本文探讨桃核承气汤对蓄血证大鼠血管MMP2、TIMP2基因表达的影响。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 健康雄性SD大鼠30只，体重300～350g（由浙江中医药大学实验动物中心提供）。造模材料：大肠杆菌内毒素（E.Cole O55:B5），美国Sigma公司产品，用生理盐水配成20μg/ml的溶液。药液制备：桃仁∶大黄∶桂枝∶芒硝∶甘草=2∶2∶1∶1∶1（中药饮片由浙江中医药大学门诊部提供），适量水煎，头煎20min，二煎30min，分别滤取药液，合并两次药液，在60℃恒温条件下浓缩成每ml含生药1g的药液备用。主要试剂：Trizol reagent,美国Invitrogen 公司产品；反转录试剂盒(Reverse Transcription System)，美国Promega 公司；Taq DNA 聚合酶，Takara公司；βactin 引物由上海生物工程技术服务有限公司合成。主要仪器：台式高速冷冻离心机，德国Heraeus 公司；PCR仪，TECHNE；紫外分析仪，ZF－1型，上海嘉鹏科技公司；电泳仪，DYY－8B型稳压稳流电泳仪；核酸蛋白仪，Amersham Biosciences。 　　1.2 方法 将30只大鼠按随机数字表法分成空白对照组(control)、模型组(model)、药物组(THCQT)3组，每组10只。造模方法参考文献［11］：模型组，间隔24h，两次尾静脉注入大肠杆菌内毒素（剂量分别为50μg/kg）；药物组，于第1次注入内毒素前2h左右，胃管内注入药物（10ml/kg），12h后再给药1次，在第2次注入内毒素前2h左右再给药1次；对照组，两次尾静脉注入生理盐水，剂量方法同上。 　　RNA的提取及逆转录：第2次注