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植物内生菌发酵培养基的初探_药学论文 植物内生菌发酵培养基的初探_药学论文 作者：陈云 曹艳茹 蔡祥凤 赵立兴 段若玲 徐丽华 【摘要】 从高活性菌株到获得高产量活性产物之间，发酵是一个重要环节。本研究设计4种内生菌发酵培养基，对89株分离自傣药植物且具有高抗菌活性的内生菌及5株潜在放线菌新种进行摇瓶发酵，发酵液的提取物用3种展层系统作薄层色谱(TLC)展层，用UV(254nm、366nm)和茴香醛试剂进行检测。实验结果表明，用1号和4号培养基发酵产生的次生代谢产物的种类最丰富，2号和3号培养基产生的较少；用II号展层系统(氯仿∶甲醇=4∶1)和III号展层系统(正丁醇∶乙酸∶水=4∶1∶5)作TLC层析，检测到的产物最多；3种检测方法以茴香醛检测到的代谢产物最丰富。对每一株菌而言，产生最多产物的发酵培养基各不相同，为了获得尽可能多的次生代谢产物，不同菌株选用的发酵培养基不一样。探究适合的发酵培养条件，为活性产物的分离、制备奠定了基础。 【关键词】 植物内生菌； 发酵培养基； TLC ABSTRACT Fermentation of 89 endophytes and 5 novel species candidates of actinomycetes were carried out by four different fermentation media. Three developing systems were used for chromatography of TLC. UV 254nm, 366nm and anisaldehyde as a chromogenic agent were used for detecting compounds of these strains. Results indicate that the metabolites of these strains were the most abundant when these strains were fermented in No.1 and No.4 media, and only few in No.2 and No.3. Metabolites of each strain were different in different media. More metabolites could be detected when the TLC was carried out in system II (chloroform∶methanol=9∶1) and system III (butanol∶acetic acid∶water=4∶1∶5) with anisaldehyde test solution. These result established a base for designing of fermentation medium, isolation and purification of effective compounds for discovery of new leader compounds from endophytes. KEY WORDS Plant endophytes; Fermentation medium; TLC 至今已描述的放线菌达40个科、180多属、4000多种［1］，从中发现的生物活性物质达11000种之多［2］，目前临床和农牧业上应用的抗生素有60%以上是放线菌生产的。当今要从普通环境微生物发现新的生物活性物质越来越困难，其中去重复就是一道难题［3］。但是，自然界仍然存在至少90%以上的未知微生物［2，4～6］，其中植物内生菌越来越受人们的重视［7］。为了充分利用云南丰富的植物内生菌资源，从中发现更多的新活性物质，近3年我们从云南西双版纳采集50科、96属的傣药植物样品123份，分离到内生菌1673株，用7种作物病原菌、4种肿瘤细胞模型，筛选到抗菌、抗肿瘤高活性菌株230株。从高活性菌株到获得高产量活性产物之间，发酵是一个重要环节。本文对89株植物内生菌和5株放线菌潜在新种的发酵培养基进行了初步研究。 1 材料和方法 1.1 菌种 从云南西双版纳傣药植物分离筛选到89株抗肿瘤、抗作物病原菌的高活性内生菌菌株，其中50株放线菌、10株真菌、29株细菌；另外有5株具有抗菌活性的放线菌潜在新种，共94个菌株。 1.2 斜面培养基 真菌 PDA固体培养基［8］。 细菌和放线菌 酵母膏4g，葡萄糖4g，麦芽膏5g［9］，复合维生素3.75mg，微量盐1ml/L，琼脂20g，1L水，pH7.2。 复合维生素 维生素B1 1mg，维生素B6 1mg，核黄素1mg，烟