珍稀药用金钗石斛组培苗遗传稳定性直接扩增长度多态性检测_药学论文.docVIP

珍稀药用金钗石斛组培苗遗传稳定性直接扩增长度多态性检测_药学论文 珍稀药用金钗石斛组培苗遗传稳定性直接扩增长度多态性检测_药学论文 【摘要】 目的研究珍稀药用金钗石斛DNA指纹图谱，初步探讨直接扩增长度多态性(DALP)分子标记技术在石斛组织培养过程中遗传稳定性检测上的应用。方法采用直接扩增长度多态性(DALP)技术对金钗石斛野生移栽苗和组培苗进行基因组DNA多态性分析。结果从12对引物组合中筛选出6对能获清晰条带的引物组合，分别利用琼脂糖和聚丙烯酰胺对DALP-PCR产物进行凝胶电泳，发现两组苗扩增的DNA带型基本一致，未发现明显变异，说明金钗石斛茎尖离体继代培养具有较高的遗传稳定性。结论DALP分子标记技术可用于石斛遗传稳定性和遗传多样性研究。 【关键词】 金钗石斛; 组培苗; 直接扩增长度多态性; 遗传稳定性; 指纹图谱 　　Abstract：ObjectiveTo study DNA fingerprint of Dendrobium nobile and application of direct amplification of length polymorphism (DALP) to the identification of genetic stability on the course of tissue culture. MethodsThe polymorphism of transplanting wild seedlings and tissue culture seedlings from D. nobile were detected by DALP technique. ResultsSix pairs of primer combinations screened from 12 pairs of primer combinations might amplify clear bands. By agarose and polyacrylamide gel electrophoresising, respectively, the DNA bandtypes of DALP-PCR products were basic consistent and the obvious variation were not shown. It indicated that the genetic stability was high on the in vitro shoot tip subculture of D. nobile. ConclusionDALP molecular marker technology can be used for the research of the genetic stability and genetic diversity on Dendrobium. 　　Key words：Dendrobium nobile; Tissue culture seedling; DALP; Genetic stability; Fingerprinting 　　金钗石斛Dendrobium nobile Lindi.为兰科石斛属多年生附生草本植物，《本草纲目》认为其能“强阴益精，厚肠胃，壮筋骨，暖水脏，补肾益力，轻身延年”等，是药用范围较广的名贵中药[1]。现代药理研究表明，石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强机体免疫力、扩张血管及抗血小板凝集等作用[2]。金钗石斛药材供应长期依赖野生资源，目前的需求量还在不断增加，野生资源已濒于枯竭状态[3]，因此开展金钗石斛的组培快繁研究对其产业化生产具有决定性的意义和作用。目前，尽管金钗石斛的组织培养已获成功[4]，但对其组织离体继代培养的遗传稳定性研究还未见报道。 　　本文采用直接扩增长度多态性(Direct Amplification of Length Polymorphism，DALP)技术对金钗石斛野生移栽苗和组培苗进行基因组DNA指纹图谱分析，初步探讨DALP分子标记技术在石斛组织培养过程中遗传稳定性检测上的应用，为人工繁殖促其产业化生产提供技术支撑。 　　1 材料 　　试材为从云南潞西2004-10采集的金钗石斛(Dendrobium nobile Lindle)野生株系，栽种在重庆市中药研究院药植园内，同年取其茎尖进行愈伤诱导培养，得其无菌苗的多年继代组培苗。分别以引种的野生栽培苗和继代组培苗的新鲜叶片为实验材料。 　　2 方法 　　2.1 组织培养取消毒后的金钗石斛野生苗茎尖作为外植体依次分别接种在培养基①MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+2.0%蔗糖，②MS+0.2 mg/L 6-BA+0.3